BMMSCs移植對低齡擴張型心肌病鼠心功能及心室肌細胞INa的影響.pdf

1、目的：
　　探究心室肌細胞鈉電流（Sodium current,INa）在阿霉素誘導的低齡擴張型心肌?。―ilated Cardiomyopathy，DCM）鼠模型中的變化情況，以及骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells，BMMSCs）移植對低齡DCM鼠心肌細胞INa的影響，并對正常低齡鼠心肌細胞ICa-L進行初步檢測。
　　方法：
　　1．低齡DCM鼠模型的建立與心功能

2、檢測：將40只健康的兩周齡SD大鼠隨機平均分為DCM組（n=20）和對照組（n=20）。DCM組予腹腔注射阿霉素1mg/kg每次，每周2次，連續(xù)6周，誘導建立DCM模型，對照組給予等量的生理鹽水腹腔注射，以病理HE染色評估心肌組織結(jié)構(gòu)的變化情況，以心臟彩色多普勒超聲（Ultrasonic cardiogram，UCG)對各組大鼠心功能及左心室內(nèi)徑進行檢測。
　　2．低齡DCM模型鼠心室肌細胞INa的檢測：對第一部分建立完成的DCM

3、組（n=16）大鼠和對照組（n=20）大鼠進行INa的檢測。各組大鼠通過酶解法分離得到單個的心室肌細胞，再通過全細胞膜片鉗技術(shù)記錄心室肌細胞的INa、電流-電壓(I-V)曲線和鈉通道激活、失活和恢復(fù)的變化情況。
　　3．BMMSCs移植對低齡DCM鼠心功能及心室肌細胞INa影響的實驗研究：取14日齡的SD鼠，通過阿霉素腹腔注射法建立45只低齡DCM模型，將其隨機平均分為DCM組、DCM+PBS移植組和DCM+MSC移植組，再取30

4、只健康同齡鼠，隨機平均分為正常組、正常+MSC移植組；MSC移植處理為左室前壁注射BMMSCs；于移植后第4周末，以熒光顯微鏡觀察心肌組織冰凍切片來評價BMMSCs的植入情況；以心臟彩色多普勒超聲（Ultrasonic cardiogram，UCG)對各組大鼠心功能進行檢測；以酶解法分離得到單個心室肌細胞，通過全細胞膜片鉗技術(shù)記錄大鼠心室肌細胞INa電流密度、鈉通道激活、失活和恢復(fù)過程的變化情況。
　　4．正常低齡鼠心室肌細胞IC

5、a-L的檢測：應(yīng)用全細胞膜片鉗技術(shù)記錄心室肌細胞的ICa-L、電流-電壓(I-V)曲線和通道激活、失活和恢復(fù)的變化情況，為下一步對L-型鈣通道的研究打下基礎(chǔ)。
　　結(jié)果：
　　1．建模完成后，病理檢測結(jié)果顯示：DCM組大鼠心肌結(jié)構(gòu)受損明顯，組織排列疏松、紊亂，心肌細胞出現(xiàn)水腫，形態(tài)較差，部分心肌纖維出現(xiàn)溶解和斷裂，而對照組大鼠心肌結(jié)構(gòu)正常完整；UCG結(jié)果顯示：與對照組比較，DCM組的心功能明顯降低，左室射血分數(shù)（Left V

6、entricular Ejection Fraction，LVEF）、左室短軸縮短率（Left Ventricular Fractional Shortening，LVFS）值較對照組明顯降低，左心室收縮末內(nèi)徑（Left Ventricular Internal Dimension systolic，LVIDs）、左心室舒張末內(nèi)徑（Left Ventricular Internal Dimension diastolic，LVIDd）值

7、較對照組增高明顯，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　2．對各組大鼠進行膜片鉗檢測，結(jié)果提示：與對照組比較，DCM組的心功能明顯降低I-V曲線上移，激活減慢，激活曲線右移，失活加快，失活曲線左移，INa電流密度下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　3．移植4周后，在熒光顯微鏡下觀察可見植入的BMMSCs在注射點附近呈團分布或沿進針路徑分布，生長良好；UCG結(jié)果顯示，CM+MSC移植組心功能較DCM組及DCM+

8、PBS移植組提高(P＜0.05)，DCM+MSC移植組移植4周后心功能較移植前提高（P＜0.05）；膜片鉗檢查顯示DCM+MSC移植組的電流密度峰值較DCM組及DCM+PBS移植組提高，I-V曲線下移，激活加快，激活曲線左移，失活減慢，失活曲線右移，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　4．膜片鉗檢測顯示：正常大鼠心室肌細胞ICa-L電流密度峰值為（10.45±1.719）pA/pF、半數(shù)穩(wěn)態(tài)激活電壓為（-17.27±2.27

9、6）mV、半數(shù)穩(wěn)態(tài)失活電壓為（-12.70±1.672）mV、恢復(fù)時間常數(shù)?為（1740.57±650.610）ms。
　　結(jié)論：
　　1．本研究所采用的阿霉素注射的方式與劑量可成功建立低齡DCM鼠模型，經(jīng)病理和心臟彩超檢測，證實其產(chǎn)生了DCM樣的改變。
　　2．阿霉素誘導的低齡DCM模型鼠的心室肌細胞鈉通道激活過程減慢，失活過程加快，INa電流密度顯著減少，，這些改變可能是低齡DCM發(fā)生傳導阻滯的原因之一。