母鼠維生素D缺乏及干預(yù)對(duì)仔鼠肺發(fā)育及VEGF、SP-C表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)建立Vit D缺乏及Vit D干預(yù)母鼠模型，觀察母鼠孕期、哺乳期Vit D缺乏及適量1,25二羥維生素D3[1,25-(OH)2D3]干預(yù)對(duì)其仔鼠肺發(fā)育及肺血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、肺組織表面活性蛋白C（SP-C）的變化，從而探討母鼠Vit D缺乏及適量干預(yù)對(duì)仔鼠肺發(fā)育的影響及可能機(jī)制。
　　方法：
　　選取健康成年雌性清潔級(jí)SD大鼠，完全隨機(jī)分為正常對(duì)照組（對(duì)照組）、Vit D缺乏組（缺乏組）、1

2、,25-(OH)2D3干預(yù)組（干預(yù)組），每組6只。對(duì)照組及干預(yù)組母鼠予以正常飼料、正常光照喂養(yǎng)，缺乏組母鼠予不含Vit D飼料、避光喂養(yǎng)，試喂2周后，用ELISA法測(cè)定三組母鼠血清25-(OH)D值，再與正常成年雄性 SD大鼠合籠交配。于受孕第7天開(kāi)始，干預(yù)組母鼠隔天一次給予1,25-(OH)2D3(10ug/kg)灌胃，對(duì)照組及缺乏組母鼠予1ml生理鹽水代替灌胃，一直到分娩后第21天，再次測(cè)三組母鼠血清25-(OH)D值，并檢測(cè)各組仔

3、鼠生后第1天及第21天血清25-(OH)D值，再取生后第1、7、14、21天仔鼠肺組織，觀察以下指標(biāo)：1.仔鼠體重及肺濕重；2.光鏡下觀察肺形態(tài)結(jié)構(gòu)；3.q-PCR法檢測(cè)肺組織VEGF mRNA水平的表達(dá)；4.免疫組織化學(xué)方法分別檢測(cè)肺組織VEGF、SP-C蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.造模結(jié)果：通過(guò)不同方式喂養(yǎng)母鼠，試喂2周后三組母鼠之間血清25-(OH)D值比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；分娩后第21天，缺乏組

4、母鼠血清25-(OH)D值明顯低于對(duì)照組及干預(yù)組母鼠，有顯著差異（P＜0.01），干預(yù)組母鼠血清25-(OH)D值高于對(duì)照組母鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；新生第1天仔鼠三組之間血清25-(OH)D值比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；新生第21天，缺乏組仔鼠血清25-(OH)D值低于對(duì)照組及干預(yù)組仔鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），干預(yù)組仔鼠血清25-(OH)D值略高于對(duì)照組仔鼠，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。<

5、br>　　2.三組仔鼠體重及肺濕重結(jié)果：隨著日齡的增加，缺乏組仔鼠體重、肺濕重均低于同日齡對(duì)照組仔鼠，增長(zhǎng)速度緩慢，缺乏組第14、21天仔鼠體重較對(duì)照組仔鼠輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），第7、14、21天仔鼠肺濕重較對(duì)照組仔鼠輕，有顯著差異（P＜0.01）；干預(yù)組仔鼠體重、肺濕重均高于同日齡對(duì)照組仔鼠，增長(zhǎng)速度稍快，其體重較對(duì)照組仔鼠比均有差異（P＜0.05，0.01），第14、21天仔鼠的肺濕重較對(duì)照組仔鼠比有差異（P＜0.0

6、5）。
　　3.三組仔鼠HE染色光鏡觀察結(jié)果：缺乏組仔鼠較同日齡對(duì)照組仔鼠比肺組織肺泡數(shù)少，肺泡腔小，形態(tài)較不規(guī)則，實(shí)性團(tuán)狀結(jié)構(gòu)區(qū)域增加，肺泡間隔較寬；干預(yù)組仔鼠較同日齡對(duì)照組仔鼠比肺組織肺泡數(shù)稍增加，肺泡腔大小均勻，實(shí)性團(tuán)狀結(jié)構(gòu)區(qū)域減少，肺泡間隔較薄。
　　4.q-PCR法檢測(cè)三組仔鼠肺組織VEGF mRNA表達(dá)結(jié)果：隨著日齡的增加，對(duì)照組及干預(yù)組仔鼠肺組織VEGF mRNA的表達(dá)量逐漸增多，缺乏組仔鼠生后第1天表達(dá)量高于

7、對(duì)照組及干預(yù)組仔鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，0.01），生后第7天較前下降，表達(dá)量明顯低于對(duì)照組及干預(yù)組仔鼠，有顯著差異（P＜0.01），之后表達(dá)量逐漸增加，但增長(zhǎng)幅度較對(duì)照組及干預(yù)組仔鼠緩慢，增長(zhǎng)曲線與正常組及干預(yù)組仔鼠有交叉現(xiàn)象；干預(yù)組仔鼠增長(zhǎng)幅度較對(duì)照組仔鼠稍快，表達(dá)量均高于對(duì)照組仔鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，0.01）。
　　5.免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)三組仔鼠肺組織VEGF蛋白表達(dá)結(jié)果：隨著日齡的增加，對(duì)照組

8、及干預(yù)組仔鼠肺組織 VEGF蛋白的表達(dá)量逐漸增多，缺乏組仔鼠生后第1天表達(dá)量較對(duì)照組及干預(yù)組仔鼠略高，生后第7天較前下降，低于對(duì)照組及干預(yù)組仔鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，0.01），之后表達(dá)量逐漸增加，增長(zhǎng)幅度較對(duì)照組及干預(yù)組仔鼠緩慢；干預(yù)組仔鼠增長(zhǎng)幅度較對(duì)照組仔鼠稍快，表達(dá)量均高于對(duì)照組仔鼠，第14、21天仔鼠之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　6.免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)三組仔鼠肺組織SP-C表達(dá)結(jié)果：三組仔鼠隨著

9、日齡的增加，肺組織SP-C的表達(dá)量逐漸增加，第21天最高；缺乏組仔鼠肺組織SP-C表達(dá)量均低于同日齡對(duì)照組及干預(yù)組仔鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，0.01）；干預(yù)組仔鼠肺組織SP-C表達(dá)量較同日齡對(duì)照組仔鼠高，第14、21天仔鼠之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.母鼠孕期、哺乳期Vit D缺乏會(huì)抑制其仔鼠生后的肺發(fā)育過(guò)程，若給予適量1,25-(OH)2D3干預(yù)，對(duì)仔鼠的肺發(fā)育過(guò)程有一定幫助。