慢性阻塞性肺疾病差異表達(dá)microRNAs及其臨床意義.pdf

1、目的:通過(guò)芯片數(shù)據(jù)庫(kù)篩選COPD外周血差異表達(dá)miRNAs，運(yùn)用生物信息學(xué)分析方法將差異表達(dá)較顯著的miRNAs進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)、GO和Pathway分析。在此基礎(chǔ)上，運(yùn)用qRT-PCR方法將候選miRNAs在臨床COPD患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中進(jìn)行驗(yàn)證，并分析差異miRNAs的臨床意義。
　　方法:1、運(yùn)用數(shù)據(jù)庫(kù)中芯片數(shù)據(jù)分析COPD外周血miRNAs表達(dá)譜，將異常表達(dá)的miRNAs與另外一個(gè)獨(dú)立樣本qPCR數(shù)據(jù)中的差異miRNAs

2、取交集，篩選出COPD異常表達(dá)的miRNAs。2、運(yùn)用TargetScan、PicTar、miRDB及Tarbase等多種軟件預(yù)測(cè)和篩選候選miRNAs的靶基因，將預(yù)測(cè)靶基因取交集，進(jìn)一步與經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的靶基因取并集，并將得出的上述靶基因進(jìn)行GO和Pathway分析。3、將臨床研究對(duì)象分為COPD組和健康對(duì)照組，收集各組研究對(duì)象的外周血及臨床資料。運(yùn)用qRT-PCR的實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞miR-23a、miR-25、miR-145

3、、miR-224的相對(duì)表達(dá)水平，分析兩組間的表達(dá)差異，并進(jìn)一步分析miRNAs表達(dá)水平與GOLD分級(jí)及急性加重頻率間的關(guān)系。4、對(duì)差異表達(dá)miRNAs進(jìn)行ROC分析。
　　結(jié)果:1、芯片數(shù)據(jù)中COPD與健康對(duì)照間差異表達(dá)的miRNAs共249個(gè)(P＜0.05)，其中COPD中表達(dá)水平較健康對(duì)照升高的98個(gè)，較健康對(duì)照降低的151個(gè)，在上述miRNAs中選擇表達(dá)差異較顯著的4個(gè)miRNAs在另一獨(dú)立樣本qPCR數(shù)據(jù)中進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯

4、示miR-23a、miR-25、miR-145、miR-224在兩組間均為差異表達(dá)。2、通過(guò)生物信息學(xué)分析方法篩選出4個(gè)miRNAs的總靶基因共3114個(gè)，進(jìn)一步GO功能分析顯示上述靶基因主要與細(xì)胞增殖、分化、凋亡、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、脂質(zhì)代謝、氧化還原等重要生物學(xué)過(guò)程相關(guān)，Pathway分析主要與MAPK、Wnt、TGF-β、Notch、T細(xì)胞受體、B細(xì)胞受體等重要信號(hào)通路相關(guān)。上述miRNAs靶基因相關(guān)的功能和通路與COPD發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。

5、3、共收集臨床健康對(duì)照組30名及COPD組50名研究對(duì)象，其中COPD組患者FEV1％pre與BMI、吸煙指數(shù)、mMRC及CAT評(píng)分相關(guān)。qRT-PCR結(jié)果顯示miR-23a、miR-25、miR-145、miR-224的相對(duì)表達(dá)水平在COPD組外周血單個(gè)核細(xì)胞中較健康對(duì)照組均降低，與GOLD分級(jí)相關(guān)，且miR-23a與miR-145在COPD非頻繁加重及頻繁加重患者的表達(dá)水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4、ROC分析結(jié)果顯示聯(lián)合檢測(cè)miR-25、m

6、iR-145、miR-224具有較高的AUC，有望成為COPD的預(yù)測(cè)指標(biāo)。
　　結(jié)論:1、COPD差異表達(dá)miRNAs（miR-23a、miR-25、miR-145、miR-224）可能在COPD發(fā)病機(jī)制相關(guān)的功能和信號(hào)通路中發(fā)揮重要作用。2、臨床COPD患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中miR-23a、miR-25、miR-145、miR-224的相對(duì)表達(dá)水平較健康對(duì)照低，在COPD患者中與GOLD分級(jí)相關(guān)，且miR-23a和miR-145