人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)衰老心肌細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)研究心肌細(xì)胞衰老相關(guān)炎癥指標(biāo)的變化，探討 hUC-MSCs對(duì) H2O2誘導(dǎo)的H9c2衰老心肌細(xì)胞的保護(hù)作用及可能機(jī)制。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)用終濃度為30μmol/L，50μmol/L，100μmol/L，150μmol/L，200μmol/L的 H2O2溶液干預(yù) H9c2心肌細(xì)胞，應(yīng)用衰老相關(guān)性β-半乳糖苷酶（Senescence-associatedβ-galactosidase, Sa-β-gal）染色法檢測(cè)衰老細(xì)胞比

2、例，并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡細(xì)胞比例，以確定最適的H2O2濃度，構(gòu)建H9c2心肌細(xì)胞衰老模型。在此基礎(chǔ)上建立hUC-MSCs與H9c2衰老心肌細(xì)胞共培養(yǎng)體系，通過(guò)Sa-β-gal染色法檢測(cè)衰老陽(yáng)性細(xì)胞所占比例的變化，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）檢測(cè)心肌細(xì)胞上清液中促炎癥因子（TNF-α、IL-1β）和抗炎癥因子（IL-10）的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1. H2O2干預(yù)誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞衰老模型的建立。
　　1.1β-半乳

3、糖苷酶染色法結(jié)果顯示：與Control組相比較，β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性心肌細(xì)胞比例隨著H2O2濃度的增大而增加，當(dāng)H2O2濃度為30μmol/L時(shí)，β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加不明顯，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；當(dāng)H2O2濃度為50μmol/L，100μmol/L，150μmol/L，200μmol/L時(shí)，β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性細(xì)胞比例顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　1.2流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示：與

4、Control組相比較，H2O2濃度的越大，心肌細(xì)胞凋亡比例越高，當(dāng)H2O2濃度為30μmol/L，50μmol/L，100μmol/L時(shí)，凋亡的心肌細(xì)胞比例差別不大，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；當(dāng)H2O2濃度為150μmol/L，200μmol/L時(shí)，心肌細(xì)胞凋亡比例顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.建立hUC-MSCs與H9c2衰老心肌細(xì)胞共培養(yǎng)體系，實(shí)驗(yàn)分四組：Control組、H2O2組、H2O

5、2+hUC-MSCs培養(yǎng)基組、H2O2+hUC-MSCs組。
　　2.1β-半乳糖苷酶染色法結(jié)果顯示：與Control相比較，H2O2組β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性心肌細(xì)胞比例明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與H2O2組相比較，H2O2+hUC-MSCs組β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性心肌細(xì)胞比例顯著降低（P＜0.05）。
　　2.2 ELISA結(jié)果顯示：與Control相比較，H2O2組心肌細(xì)胞上清液中促炎因子TNF-α、

6、IL-1β表達(dá)水平顯著增加，抗炎因子IL-10表達(dá)水平顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與H2O2組相比較，H2O2+hUC-MSCs組心肌細(xì)胞上清液中促炎因子 TNF-α、IL-1β表達(dá)水平顯著降低，抗炎因子 IL-10表達(dá)水平顯著增加（P＜0.05）。
　　結(jié)論：當(dāng)應(yīng)用100μmol/L的H2O2誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞時(shí)，H9c2心肌細(xì)胞衰老模型構(gòu)建成功。hUC-MSCs與H9c2衰老心肌細(xì)胞共培養(yǎng)體系建立后，可見(jiàn)h