Suramin作為預(yù)防艾滋病多效殺微生物劑的研究.pdf

1、研究背景:
　　艾滋病(Acquired immunodeficiency sydrom，AIDS)是由人類免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus type1，HIV-1)引起的一種免疫能力喪失的傳染性疾病，嚴(yán)重威脅著人類的生命和健康。全球范圍內(nèi)，新感染病例數(shù)居高不下，其中80％新感染病例來自性傳播，性傳播已成為HIV-1最主要的傳播途徑。殺微生物劑是種有效預(yù)防HIV-1性傳播的重要手段。但迄今為止

2、，仍未開發(fā)出有效的殺微生物劑。精液來源的病毒增強(qiáng)因子(SEVI)能削弱殺微生物劑的抗病毒活性同時(shí)顯著促進(jìn)病毒的感染。SEVI是前列腺酸性磷酸酶(PAP)裂解的多肽片段PAP248-286自我組裝形成的淀粉樣纖維。SEVI的陽(yáng)離子特性能消除病毒和細(xì)胞的靜電排斥，增大病毒和靶細(xì)胞接觸幾率，從而增強(qiáng)HIV-1感染。因此，SEVI是殺微生物劑的一個(gè)重要靶點(diǎn)。前期研究表明，HIV-1進(jìn)入抑制劑ADS-J1既能拮抗SEVI，與抗病毒藥物合用具有協(xié)同

3、抗病毒效果。但由于ADS-J1具有潛在的致癌性，限制了它的臨床應(yīng)用。在ADS-J1類似物中篩選到一個(gè)本身具有抗HIV-1活性的化合物Suramin，它是臨床治療錐蟲病的經(jīng)典老藥，具有強(qiáng)大的藥理活性:抑制蛋白酶和阻斷生長(zhǎng)因子等。前期研究表明，Suramin能抑制多肽PAP248-286形成SEVI，本文將深入研究Suramin抑制及拮抗SEVI的作用及機(jī)制;由于Suramin本身具有抗HIV-1活性，也將探討其與抗病毒藥物合用協(xié)同抗病毒效

4、果，期望將Suramin開發(fā)為殺微生物劑或其輔助用藥，更好地預(yù)防HIV-1性傳播。
　　研究目的:
　　從具備拮抗HIV-1性傳播過程作用多靶點(diǎn)能力的角度闡述Suramin用于預(yù)防HIV-1性傳播的新的可能及機(jī)制，從老藥新用的角度尋求擴(kuò)大Suramin臨床適應(yīng)癥，為預(yù)防HIV-1性傳播的殺微生物劑研發(fā)提供新的研究思路。
　　研究方法:
　　1.剛果紅染色、透射電鏡、激光共聚焦顯微鏡、圓二色譜、Western bl

5、ot和病毒感染實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)Suramin對(duì)SEVI形成及纖維本身的影響。
　　2.病毒感染實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Suramin合用抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物(ARVs)的抗病毒效果。
　　3.XTT法檢測(cè)Suramin對(duì)生殖道和淋巴細(xì)胞的毒性作用。通過家兔陰道粘膜刺激性實(shí)驗(yàn)，Suramin凝膠劑進(jìn)行安全性初步評(píng)價(jià)，其中包括組織病理學(xué)檢查、ELISA法檢測(cè)陰道灌洗液細(xì)胞因子表達(dá)水平和PCNA免疫組化評(píng)價(jià)家兔陰道組織的炎癥。
　　4.多肽PAP2

6、48-286與Suramin進(jìn)行分子動(dòng)力學(xué)(MD)模擬，從分子動(dòng)力學(xué)角度證明Suramin抑制SEVI形成機(jī)制。
　　研究結(jié)果:
　　1.Suramin能濃度依賴性抑制多肽PAP248-286纖維化;Suramin能結(jié)合SEVI，阻斷它和HIV-1的結(jié)合，降低SEVI促進(jìn)HIV-1的感染能力。
　　2.Suramin在精液中聯(lián)合ARVs可以抑制CCR5受體和CXCR4受體嗜性HIV-1，50％抑制率時(shí)的聯(lián)合指數(shù)CI值范

7、圍為0.233～0.739。
　　3.Suramin在體外對(duì)生殖道細(xì)胞和淋巴細(xì)胞基本沒有毒性作用，它對(duì)各細(xì)胞系的CC50均大于1000μM。組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示Suramin凝膠組的陰道粘膜上皮細(xì)胞均較完整，固有層組織僅輕度水腫;Suramin凝膠不會(huì)促進(jìn)炎癥因子的釋放;Suramin凝膠組的陰道上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞PCNA陽(yáng)性表達(dá)率與生理鹽水組無顯著性差異。
　　4.MD模擬表明分子結(jié)構(gòu)非常相似的3個(gè)化合物與PAP248-

8、286結(jié)合模式不同，分子結(jié)構(gòu)趨向于立體的Suramin能把PAP248-286完全包裹住，另外其改變PAP248-286單體結(jié)構(gòu)的程度最大;Suramin幾乎與PAP248-286上所有的氨基酸有氫鍵或疏水作用:氫鍵有19個(gè)，疏水作用數(shù)為45。
　　研究結(jié)論:
　　1.Suramin能緊密結(jié)合多肽PAP248-286，抑制其自我聚合形成淀粉樣纖維SEVI。
　　2.Suramin阻斷SEVI和HIV-1結(jié)合，拮抗其增強(qiáng)