腫瘤相關(guān)巨噬細胞的異質(zhì)性與卵巢癌異質(zhì)性的關(guān)聯(lián).pdf

1、研究目的：
　　巨噬細胞根據(jù)其功能與表達細胞因子的不同，可以分為兩個極化方向：能夠殺死病原體與腫瘤的M1，以及促進腫瘤細胞的生長、遷移甚至侵襲能力的M2。后者在免疫組化或流式細胞檢測中常用CD68+CD206或CD68+CD163進行M2細胞的特異標記以進行識別與分選。此外，M2細胞還可以細分為若干亞群，這些亞群之間在細胞因子及細胞表面分子的表達上均有所差異。近來多個實驗證實，腫瘤組織的微環(huán)境內(nèi)有大量巨噬細胞，稱之為腫瘤相關(guān)巨噬細

2、胞(TAM)，TAM在細胞表型上可能與M2更為相似;此外，腫瘤細胞也可以誘導巨噬細胞向M2方向極化，IL-6、LIF、IFN-γ等細胞因子可能在這一誘導過程中起了重要作用。
　　另一方面，關(guān)于腫瘤細胞異質(zhì)性的研究一直是腫瘤學的重點，除了腫瘤細胞本身的異質(zhì)性，腫瘤相關(guān)巨噬細胞是否也具有異質(zhì)性即是本實驗所討論的重點。通過不同類型的卵巢癌細胞系與單一來源的巨噬細胞進行相互作用，以期找到其中的差異性及其背后的原因。
　　研究方法：<

3、br>　　1.利用聚酯透明膜transwell使卵巢癌細胞與巨噬細胞系進行非接觸性共培養(yǎng)，誘導巨噬細胞極化;
　　2.利用流式細胞術(shù)對誘導后的巨噬細胞進行分群分析，計算CD68+CD206雙陽性細胞（即M2細胞）占全部CD68陽性細胞（即巨噬細胞）的比例，比較不同誘導條件下M2細胞極化比例的差異，及其隨時間的變化;
　　3.收集經(jīng)不同條件誘導極化的巨噬細胞的上清，利用ELISA對細胞上清中的細胞因子濃度進行測定與分析;

4、>　　4.將經(jīng)過不同誘導條件極化的巨噬細胞與A2780反向共培養(yǎng)一定時間后，測定不同組A2780生長速率的變化以及細胞因子表達上的差異;
　　研究結(jié)果：
　　1.不同卵巢癌誘導巨噬細胞向M2極化的能力不一樣，且群體中M2比例隨時間變化的規(guī)律也不同。
　　2.不同卵巢癌細胞誘導出的M2細胞分泌的細胞因子、對腫瘤細胞的生長促進作用也具有異質(zhì)性，即不同腫瘤細胞誘導出的M2細胞本身也具備異質(zhì)性。
　　3.反向誘導72h后

5、，平均IL-10濃度與相應(yīng)腫瘤細胞生長速率呈現(xiàn)顯著正相關(guān)關(guān)系，提示IL-10可能通過巨噬細胞-卵巢癌的相互關(guān)系影響卵巢癌的增殖與發(fā)展。
　　4.永生化卵巢上皮細胞在誘導巨噬細胞向M2極化方面表現(xiàn)出了與卵巢癌相似的特性，若比較永生化卵巢上皮細胞基因結(jié)構(gòu)與正常卵巢上皮細胞之間的差異，或許可提示巨噬細胞極化過程中有重要作用的基因。
　　研究結(jié)論：
　　卵巢癌細胞在誘導巨噬細胞向M2極化方面具有異質(zhì)性，此種差異不僅存在于透明細