CEACAM1對NK細(xì)胞調(diào)控功能的研究.pdf

1、NK細(xì)胞通過其表面的各種活化性受體和抑制性受體發(fā)揮作用，目前已知的NK細(xì)胞活化性受體有多種，主要包括NKG2D、NCRs家族(NKp30、NKp44、NKp40)等，抑制性受體主要包括KIRs、LAG-3、TIGIT等。近些年發(fā)現(xiàn)癌胚抗原相關(guān)黏附分子1 (CEACAM1)具有免疫抑制性分子的功能，成為研究熱點(diǎn)。CEACAM1是癌胚抗原CEACAM家族重要的成員，其廣泛表達(dá)于腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞。其作用方式為互為

2、受配體，能和TIM-3形成異源二聚體，也能和NKG2D作用，抑制下游信號。以往的研究多關(guān)注在CEACAM1對腫瘤細(xì)胞代謝及生長的調(diào)控上，近幾年研究熱點(diǎn)轉(zhuǎn)移到其對免疫細(xì)胞功能的調(diào)控上，在結(jié)腸癌模型中，聯(lián)合阻斷T細(xì)胞上CEACAM1和TIM-3的表達(dá)，獲得了比PD-1抗體更好的療效，小鼠生存期明顯延長，腫瘤大小得到控制。由于NK細(xì)胞上表達(dá)CEACAM1， CEACAM1是否同樣能調(diào)控NK細(xì)胞的功能？為此我們進(jìn)行了研究。
　　我們使用R

3、T-PCR和qPCR比較了多種細(xì)胞系上CEACAM1的mRNA的表達(dá)分布，使用FACS分別檢測腫瘤細(xì)胞系和NK細(xì)胞系上CEACAM1的表達(dá)量。為了探討細(xì)胞因子對NK細(xì)胞CEACAM1的表達(dá)調(diào)控作用，我們選用細(xì)胞因子IL-12、IL-4處理NK細(xì)胞。為了研究CEACAM1相互作用對NK細(xì)胞功能的影響，我們采用慢病毒包裝系統(tǒng)，在293T細(xì)胞上過表達(dá)CEACAM1，再與不同程度表達(dá)CEACAM1的NK細(xì)胞系進(jìn)行共培養(yǎng)，檢測脫顆粒水平及細(xì)胞因子

4、分泌水平的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:NK-92細(xì)胞高表達(dá)CEACAM1，NKG細(xì)胞低表達(dá)CEACAM1，腫瘤細(xì)胞均不表達(dá)或低表達(dá)CEACAM1。IL-12能夠顯著上調(diào)NKG細(xì)胞上CEACAM1的表達(dá)， IL-4對NK-92細(xì)胞作用不明顯。穩(wěn)轉(zhuǎn)CEACAM1的靶細(xì)胞能夠降低共培養(yǎng)過程中NK-92細(xì)胞、NKG細(xì)胞的脫顆粒水平，抑制NKG細(xì)胞Granzyme B的分泌，降低NK-92細(xì)胞的IFN-γ分泌水平。CEACAM1顯著地抑制了NK細(xì)胞的直接