Kv7通道對子癇前期胎盤絨毛膜板動脈血管張力的影響及機制.pdf

1、目的:通過對比正常血壓妊娠(NP)和子癇前期(PE)胎盤絨毛膜板動脈(CPAs)上Kv7通道表達及其對血管張力調(diào)節(jié)功能的差異，探討Kv7通道對子癇前期胎盤絨毛膜動脈血管張力的影響及可能的機制。
　　方法:
　　1、離體血管環(huán)張力實驗:①檢測不同濃度Kv7通道阻滯劑XE991(10-7-10-4mol/L)對NP組(n=10)和PE組(n=10) CPAs血管環(huán)基礎(chǔ)張力的影響，并分析比較NP組和PE組CPAs血管在10-6、1

2、0-5、5×10-5 mol/L不同濃度XE991作用下基礎(chǔ)張力的變化;②檢測不同濃度血管預(yù)收縮劑U46619（血栓素A2受體激動劑）（10-10-3×10-6 mol/L）在無XE991預(yù)處理或有XE991預(yù)處理時對NP組(n=10)和PE組(n=10) CPAs血管環(huán)張力的影響，并分析比較NP組和PE組XE991對預(yù)收縮劑U46619收縮作用影響的差異;③檢測不同Kv7通道開放劑Retigabine、BMS-204352、ICA-2

3、7243、ML277（10-7-10-4mol/L）對NP組(n=10)和PE組(n=10) U46619(10-7mol/L)預(yù)收縮CPAs血管環(huán)張力的影響;
　　2、實時熒光定量PCR(QPCR):15例確診為子癇前期并在該院終止妊娠孕婦為PE組，15例我院終止妊娠的血壓正常孕婦為NP組，分離提取胎盤絨毛膜板動脈血管平滑肌總RNA，合成cDNA并進行SYBR Green熒光定量PCR反應(yīng)，得到相應(yīng)的Ct值，計算出ΔCt值（=目

4、的基因Ct值-β-actin內(nèi)參基因的Ct值），然后以NP組第一個樣本為參照因子計算ΔΔCt（=目的基因ΔCt值-NP1目的基因ΔCt值），2-ΔΔCt處理后可進行相對表達量分析;
　　3、Western blotting實驗:NP組和PE組標本各15例均來自定量PCR實驗中研究對象，提取CPAs血管平滑肌總蛋白并測定蛋白濃度，SDS-PAGE電泳后轉(zhuǎn)至PVDF膜，抗體孵育后凝膠成像系統(tǒng)成像后保存圖像，用Quantity-One軟

5、件測量灰度值，以目的蛋白與內(nèi)參β-Actin蛋白灰度值比值作為該目的蛋白的相對表達量。實驗結(jié)果以均數(shù)±標準差(x±s)表示，采用SPSS11.0和GraphPad Prism5.0軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:
　　(1)離體血管環(huán)實驗結(jié)果:①Kv7離子通道非特異阻斷劑XE991(10-7-10-4 mol/L)能濃度依賴性的升高NP組(n=10) CPAs血管環(huán)的基礎(chǔ)張力，與DMSO（二甲亞砜溶劑）對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)

6、意義;在5x10-5mol/L時張力變化百分比達最大，為44.67±9.52％，在10-4mol/L時出現(xiàn)明顯舒張反應(yīng)，張力下降達29.61±6.47％左右。Kv7離子通道非特異阻斷劑XE991(10-6，10-5，5×10-5M/L)收縮PE組(n=10) CPAs血管環(huán)的作用較NP組明顯減弱，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。②對NP組來說，未加XE991預(yù)處理時，預(yù)收縮劑U46619（10-10-3×10-6mol/L）能濃度依賴性的收縮CPA

7、s血管環(huán)，與DMSO對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;加10-5mol/L XE991孵育后，U46619（10-10-3×10-6 mol/L）各濃度引起的張力變化百分比均較未用XE991孵育明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。對PE組來說，加10-5mol/LXE991孵育后，U46619在10-8、10-7、10-6mol/L濃度引起的CPAs血管環(huán)張力變化百分比較未加10-5mol/L XE991孵育相比差異不大，不具有統(tǒng)計學(xué)意義。③NP

8、組:與DMSO對照組相比，Kv7通道開放劑Retigabine(n=10)、BMS-204352(n=10)（10-9～10-4mol/L）均能濃度依賴性的舒張U46619(10-7mol/L)預(yù)收縮的CPAs血管環(huán),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;但ICA-27243(n=10)、ML277(n=10)對U46619(10-7mol/L)預(yù)收縮的血管環(huán)張力無影響,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。PE組:與NP組對比，Retigabine(n=10)、BMS-

9、204352(n=10)(10-9～10-4mol/L)舒張U46619(10-7mol/L)預(yù)收縮的CPAs血管環(huán)的能力明顯減弱，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;ICA-27243(n=10)(10-9～10-4mol/L)在10-5mol/L和10-4mol/L濃度能舒張CPAs血管環(huán),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。ML277對U46619(10-7mol/L)預(yù)收縮的CPAs血管環(huán)的舒張作用不明顯,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(2)NP組(n=1

10、5)和PE組(n=15)兩組比較發(fā)現(xiàn)基因KCNQ1、KCNQ2、KCNQ3、KCNQ4、KCNQ5的mRNA相對表達量分別是:1.1148±0.0351、1.0172±0.0247、1.0337±0.0224、1.0223±0.0473、1.0280±0.0510和1.1017±0.0547、0.9993±0.0589、1.7448±0.0678、0.1123±0.0117、0.1133±0.0129;而且與NP組相比，KCNQ1和KC

11、NQ2的mRNA的表達水平差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義，基因KCNQ3、KCNQ4和KCNQ5的mRNA的表達水平差異具有統(tǒng)計學(xué)意義; PE組基因KCNQ3的mRNA表達水平明顯上調(diào)，基因KCNQ4和KCNQ5的mRNA表達水平明顯下調(diào)。
　　(3)NP組(n=15)KCNQ3-5的蛋白相對表達量分別是:0.1845±0.032、0.6147±0.0426、0.5738±0.0192，PE組(n=15)KCNQ3-5的蛋白相對表達量分別是

12、:0.5083±0.0377、0.2657±0.0461、0.2594±0.0587，三者之間兩兩比較差異明顯，具有統(tǒng)計學(xué)意義;與NP組相比，PE組基因KCNQ3的蛋白表達水平明顯上調(diào)，基因KCNQ4和KCNQ5的蛋白表達水平明顯下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1.Kv7通道參與調(diào)節(jié)正常血壓妊娠的胎盤絨毛膜板動脈血管張力;與正常血壓妊娠相比，Kv7通道調(diào)節(jié)子癇前期的胎盤絨毛膜板動脈血管張力的能力明顯減弱;
　　2.與正常血壓妊

13、娠相比，子癇前期妊娠婦女CPAs血管平滑肌上KCNQ1、KCNQ2的mRNA表達差異不明顯，KCNQ3亞型的mRNA及蛋白表達明顯上調(diào)，KCNQ4、KCNQ5的mRNA及蛋白表達明顯下調(diào);
　　3.Kv7離子通道調(diào)節(jié)子癇前期絨毛膜板動脈張力的能力明顯減弱主要與KCNQ4和KCNQ5亞型表達下調(diào)有關(guān);
　　4.KCNQ3通道可能參與調(diào)節(jié)子癇前期妊娠婦女的CPAs血管的舒張，即KCNQ3通道的表達及功能的轉(zhuǎn)變可以看作是KCNQ4