硒蛋白P在非酒精性脂肪性肝病中的血清學(xué)特點和作用機(jī)制研究.pdf

1、背景與目的:
　　隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展和生活方式的改變，非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fattyliver disease，NAFLD)正逐漸成為全球發(fā)病率最高的慢性肝病之一。目前，我國成人NAFLD患病率約為15-20％。NAFLD成為繼病毒性肝炎、酒精性肝病后，肝硬化和肝癌的主要病因，并通過加重糖、脂代謝紊亂，促進(jìn)代謝性疾病的發(fā)生與發(fā)展。近年來，肝臟因子與NAFLD等代謝性疾病的關(guān)系備受關(guān)注。研究表明肝臟因子硒蛋白P(

2、Selenoprotein P，SeP)在NAFLD、2型糖尿病及肥胖患者外周血中升高，且被認(rèn)為能夠促進(jìn)胰島素抵抗。然而SeP與NAFLD的關(guān)系及其背后的分子機(jī)制尚未闡明。因此，本研究擬從國人NAFLD患者中SeP血清學(xué)特征和SeP與肝臟脂肪變性的關(guān)系入手進(jìn)行探究，以期為NAFLD的診斷提供新思路，并且迸一步闡釋NAFLD的發(fā)生發(fā)展機(jī)制。
　　方法:
　　為了探究NAFLD患者中SeP血清學(xué)特征，我們進(jìn)行了一項病例對照研究。

3、對象來源于2016年3月至2016年10月期間于浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院參加體檢的人群。采用調(diào)查表詢問一般情況及既往病史，并采集其體格檢查數(shù)據(jù)。空腹抽血測定血清學(xué)指標(biāo)，并采用人SeP酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒測定血清SeP濃度。研究對象肝臟脂變的診斷主要通過腹部B超進(jìn)行。
　　為進(jìn)一步探究SeP在NAFLD中的作用機(jī)制，體內(nèi)實驗我們選取雄性C57BL/6小鼠，采用高脂飲食喂養(yǎng)，誘導(dǎo)NAFLD動物模型;體外實驗選用人肝癌細(xì)胞株HepG

4、2細(xì)胞，采用400μM棕櫚酸刺激24h誘導(dǎo)NAFLD細(xì)胞模型。利用熒光實時定量PCR及蛋白免疫印跡等手段檢測NAFLD小鼠及細(xì)胞模型中SeP的mRNA、蛋白表達(dá)變化。體外采用小干擾RNA干擾技術(shù)抑制SeP表達(dá)，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)提高SeP表達(dá)，并用SeP純化重組蛋白培養(yǎng)細(xì)胞。利用細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量測定觀察SeP表達(dá)變化對肝細(xì)胞脂肪變性的影響，進(jìn)一步采用蛋白免疫印跡等分子生物學(xué)手段分析SeP對相關(guān)信號通路的調(diào)控作用。
　　結(jié)果:
　

5、　病例對照研究共納入158名研究對象，其中NAFLD患者79例，對照組79例，兩組對象之間年齡和性別無顯著差異。NAFLD患者血清SeP水平顯著高于對照組（13.4±7.0 vs.11.1±7.1μg/mL，p＜0.05）。隨血清SeP的升高，NAFLD的檢出率呈升高趨勢，其中中等SeP組NAFLD檢出率顯著高于低SeP組(58％ vs.38％，p＜0.05)。而且隨著NAFLD嚴(yán)重程度的增加血清SeP水平顯著升高;其中，中度NAFLD

6、組血清SeP濃度（13.1±5.7μg/mL）和重度組（15.6±8.1μg/mL）顯著高于非NAFLD組SeP濃度（11.1±7.1μg/mL），p值分別小于0.05和0.01。進(jìn)一步分析提示，血清SeP水平與NAFLD危險因素體重指數(shù)(r=0.287，p＜0.05)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(r=0.275，p＜0.001)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(r=0.199，p＜0.05)、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(r=0.231，p＜0.01)及血清尿酸(r=0.208，p＜0

7、.01)呈正相關(guān)。
　　SeP蛋白在NAFLD小鼠及細(xì)胞模型中表達(dá)均明顯升高，而sepp1 mRNA在兩模型中表達(dá)下降。體外小干擾RNA抑制SeP表達(dá)能顯著降低肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量，提高腺苷酸活化蛋白激酶(Adenosine Monophosphate Activated Protein，AMPK)及乙酰輔酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase，ACC)磷酸化水平;體外SeP過表達(dá)能顯著加重肝細(xì)胞脂肪變性并降低A

8、MPK及ACC磷酸化水平。采用SeP純化重組蛋白培養(yǎng)HepG2細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平隨SeP處理濃度的升高呈上升趨勢。
　　結(jié)論:
　　NAFLD患者中血清SeP水平升高，且SeP與NAFLD患病風(fēng)險及疾病嚴(yán)重程度有關(guān)。血清SeP水平與NAFLD危險因素如體重指數(shù)、尿酸等呈正相關(guān)。在NAFLD模型中SeP蛋白水平上升，抑制SeP表達(dá)能改善肝細(xì)胞脂變而高表達(dá)SeP則加重肝細(xì)胞脂變，推測SeP可能通過AMPK-ACC信號通路