Sirt1調(diào)控自噬在Ⅰ型糖尿病心肌缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制研究.pdf

1、第一部分:不同時(shí)期Ⅰ型糖尿病對(duì)小鼠心肌缺血再灌注損傷的影響及其作用機(jī)制研究
　　研究背景:缺血再灌注損傷的存在嚴(yán)重影響了冠脈再灌注治療的獲益。臨床冠心病患者常伴糖尿病，且伴糖尿病者進(jìn)行再灌注治療后的總體預(yù)后更差，但糖尿病對(duì)缺血再灌注損傷的直接影響尚無(wú)定論，有研究表明糖尿病對(duì)再灌注損傷的作用和糖尿病的病程進(jìn)展有關(guān)，但其具體過(guò)程和機(jī)制尚不明確。
　　目的:(1)分別觀(guān)察早期（2周）和進(jìn)展期（12周）的Ⅰ型糖尿病對(duì)小鼠心肌缺血再灌

2、注損傷的影響;(2)研究在早期（2周）和進(jìn)展期（12周）的Ⅰ型糖尿病中，心肌缺血再灌注損傷后自噬活性的變化情況。
　　方法:在STZ誘導(dǎo)的Ⅰ型糖尿病的早期（2周）和進(jìn)展期（12周）分別建立小鼠在體心肌缺血再灌注損傷模型，應(yīng)用TTC染色和血清cTnⅠ含量測(cè)定評(píng)價(jià)心肌損傷，TUNEL染色和caspase-3測(cè)細(xì)胞凋亡，Western Blot評(píng)估自噬活性。結(jié)果:1）對(duì)比非糖尿病組，2周糖尿病組在心肌缺血再灌注后心梗面積和血清cTnⅠ含

3、量明顯降低，細(xì)胞凋亡明顯減少，自噬活性輕度上調(diào);2）對(duì)比非糖尿病組，12周糖尿病組心肌在缺血再灌后心梗面積和cTnⅠ顯著升高，細(xì)胞凋亡明顯增加，自噬活性顯著降低。
　　結(jié)論:早期糖尿病對(duì)心肌缺血再灌損傷有保護(hù)作用，而進(jìn)展期糖尿病的心肌則更容易受到缺血再灌注的損傷，這可能與早期糖尿病上調(diào)心肌自噬活性，而進(jìn)展期糖尿病下調(diào)自噬活性有關(guān)。
　　第二部分 Sirt1在Ⅰ型糖尿病對(duì)缺血再灌注損傷后心肌自噬活性的調(diào)節(jié)中的作用及其機(jī)制研究<

4、br>　　研究背景:我們的前期研究表明自噬活性的變化可能是不同時(shí)期的Ⅰ型糖尿病對(duì)心肌缺血再灌注損傷敏感性不同的重要原因。但不同時(shí)期糖尿病差異性調(diào)控自噬的機(jī)制尚未可知。有研究報(bào)道Sirt1在饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬中發(fā)揮了重要作用。我們推測(cè)Sirt1在不同時(shí)期糖尿病對(duì)自噬的差異性調(diào)節(jié)中發(fā)揮了作用目的:1）觀(guān)察Sirt1敲除對(duì)心肌缺血再灌注損傷后自噬活性的調(diào)節(jié)作用及其對(duì)心肌損傷的影響;2）觀(guān)察心肌特異性Sirt1敲除后，早期糖尿病對(duì)心肌缺血再

5、灌損傷的保護(hù)作用是否依然存在;3）觀(guān)察在進(jìn)展期糖尿病動(dòng)物的心肌中上調(diào)Sirt1對(duì)心肌自噬活性以及缺血再灌注損傷的影響及其機(jī)制。
　　方法:通過(guò)誘導(dǎo)型心肌特異性Sirt1敲除模型，在非糖尿病小鼠和2周糖尿病小鼠中分別研究Sirt1在心肌缺血再灌注過(guò)程中對(duì)自噬的調(diào)節(jié)作用及其對(duì)心肌損傷的影響;通過(guò)心肌內(nèi)注射攜帶Sirt1基因的慢病毒載體上調(diào)心肌Sirt1表達(dá)，研究其對(duì)12周糖尿病心肌缺血再灌注后自噬活性和心肌損傷的影響。
　　結(jié)果

6、:1）Sirt1敲除增加了缺血再灌注損傷后的心梗面積和細(xì)胞凋亡，并通過(guò)調(diào)節(jié)FoxO1-Rab7和AMPK-mTOR信號(hào)通路，下調(diào)了心肌自噬活性;2）Sirt1敲除后，2周糖尿病組心肌缺血再灌注損傷后心梗面積和細(xì)胞凋亡數(shù)與非糖尿病組無(wú)差異;3）在12周糖尿病小鼠的心肌中，Sirt1過(guò)表達(dá)能上調(diào)自噬活性，減少再灌注損傷后的細(xì)胞凋亡，有減小心梗面積的趨勢(shì)但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:Sirt1在不同時(shí)期Ⅰ型糖尿病對(duì)缺血再灌注損傷后心肌自噬

7、活性的調(diào)節(jié)中發(fā)揮了重要作用。
　　第三部分遠(yuǎn)端缺血期處理聯(lián)合遠(yuǎn)端缺血后處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究
　　研究背景:遠(yuǎn)端缺血處理是一種無(wú)創(chuàng)的內(nèi)源性心肌保護(hù)措施，其在缺血前(遠(yuǎn)端缺血預(yù)處理(RIPC))，缺血時(shí)（遠(yuǎn)端缺血期處理（RIPerC））和再灌早期（遠(yuǎn)端缺血后處理（RIPostC））都能保護(hù)心肌免受缺血再灌注損傷(IRI)。RIPerC和RIPostC由于無(wú)需預(yù)測(cè)缺血事件，有更好的實(shí)用價(jià)值，而它們的聯(lián)

8、合作用尚未被報(bào)道過(guò)。
　　目的:本研究旨在:1）比較RIPerC與RIPostC心肌保護(hù)作用的強(qiáng)度;2）觀(guān)察RIPerC聯(lián)合RIPostC是否可以產(chǎn)生疊加效應(yīng)，對(duì)心肌缺血再灌注損傷發(fā)揮更強(qiáng)的保護(hù)作用;3）發(fā)掘RIPerC和RIPostC各自以及聯(lián)合運(yùn)用時(shí)，對(duì)抗心肌缺血再灌注損傷的潛在機(jī)制，探討其異同。
　　方法:將雄性SD大鼠隨機(jī)分成五組:1）假手術(shù)組;2）缺血再灌(IR)組:結(jié)扎前降支對(duì)大鼠心肌進(jìn)行缺血40min/再灌注1

9、20min處理。3）RIPerC組:IR+自缺血開(kāi)始時(shí)給予大鼠雙下肢四個(gè)循環(huán)的5min缺血/5min再灌注處理。4）RIPostC組:IR+自心肌再灌注開(kāi)始時(shí)給予大鼠雙側(cè)下肢四個(gè)循環(huán)的5min缺血/5min再灌注處理;5）聯(lián)合組（RIPerC+ RIPostC）;試驗(yàn)通過(guò)TTC和TUNEL染色分別評(píng)價(jià)梗死面積和心肌凋亡，壓力導(dǎo)管測(cè)心功能，ELISA法測(cè)血清cTnⅠ和炎癥因子含量，Western Blot法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)。
　　結(jié)

10、果:對(duì)比IR組，RIPerC和RIPostC都能有效降低缺血再灌注損傷后的心梗面積，減少細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng)，但它們的聯(lián)合運(yùn)用并不能進(jìn)一步改善以上指標(biāo)。Akt，ERK1/2，and GSK-3β和STAT-3的磷酸化水平在RIPerC、RIPostC以及RIPerC+RIPostC中都發(fā)生了上調(diào)，但三者之間并無(wú)差異。
　　結(jié)論:RIPerC和RIPostC通過(guò)“RISK”和“SAFE”信號(hào)通路的激活對(duì)心肌缺血再灌注損傷起保護(hù)作用，它