蛋白藥物內耳緩釋給藥系統(tǒng)的構建與評價.pdf

1、內耳疾病如特發(fā)性突聾、梅尼埃病、蝸性耳鳴、醫(yī)源性感音神經性聾等，嚴重影響患者的生活。但由于血-迷路屏障（BLB）的存在，使得全身給藥效果不理想。采用臨床常用的內耳給藥方法—鼓室給藥（IT），藥物可經圓窗膜（RWM）進入內耳，因而可用于內耳疾病的治療。臨床采用干擾素α（IFNα）可治療突發(fā)性耳聾。因此，本研究選用IFNα-2b作為蛋白類模型藥物，針對其體內半衰期短、穩(wěn)定性較差等特點，將其制成經內耳給藥的納米制劑和溫敏凝膠制劑及復合釋藥系統(tǒng)

2、，并開展體內外評價，期望能為治療內耳疾病的蛋白藥物緩釋制劑的研發(fā)提供參考與借鑒。
　　采用復乳-溶劑揮發(fā)法制備IFNα-2b聚乳酸羥基乙酸（PLGA）納米粒（NPs），并對其制備工藝進行單因素考察，得到了對包封率影響較大的三個因素：載體材料PLGA用量、乳化劑 PVA濃度、外水相體積。以這三個影響因素為變量，以包封率、粒徑為指標，采用Box-Behnken實驗設計，用響應面法進行處方優(yōu)化。最終得到IFNα-2b PLGA NPs最

3、優(yōu)處方為PLGA用量為114 mg，乳化劑PVA濃度為1％，外水相用量選擇9 mL，制備得到NPs包封率為38.1%，粒徑為298 nm，穩(wěn)定性良好；體外釋放結果顯示，相比較溶液劑，PLGA納米粒有一定的緩釋效果，在體外可持續(xù)釋放36 h。
　　選取泊洛沙姆407（P407）和泊洛沙姆188（P188）為基質，用冷溶法制備凝膠溶液，試管倒置法確定膠凝溫度，研究了P407和P188的濃度與相變溫度的關系，采取相變溫度合適的三個處方進

4、行體外溶蝕試驗，選出最優(yōu)處方P407：20%、P188：5%，膠凝溫度為32.3℃，并對其進行流變學考察，結果測得膠凝溫度與試管倒置法基本一致。泊洛沙姆凝膠分別裝載BSA及其NPs，體外釋放考察顯示兩者均具有緩釋作用，泊洛沙姆凝膠能在體外釋放17 h，而載NPs泊洛沙姆凝膠（NPs/P）能持續(xù)釋藥48 h。
　　以殼聚糖（CS）和β-甘油磷酸鈉（β-GP）為原料，通過調節(jié)體系的pH值，制備CS/β-GP溫敏凝膠，采用倒置法和濁度法

5、確定體系的膠凝時間。分別考察了CS的規(guī)格、CS的濃度、β-GP的用量對膠凝時間的影響，最終選用脫乙酰度為96.2%的CS、配制濃度為2%（W/V），取2mLCS溶液，加入400μL56%β-GP，在體溫環(huán)境放置3 min即形成凝膠。所制備的凝膠溶脹性和保水性能良好，可滿足體內給藥后持續(xù)釋藥的要求；體外降解實驗顯示，CS/β-GP凝膠在含酶的PBS溶液中，能緩慢降解，一個月降解50%左右。紅外測試結果表明，CS/β-GP凝膠的形成并不僅是

6、簡單的物理混合，還存在氫鍵力的作用；凝膠掃描電鏡圖顯示，NPs粘在凝膠骨架上，可通過凝膠內部孔道持續(xù)釋放藥物。體外釋放實驗表明，CS凝膠能緩慢釋藥36h，而載NPs CS凝膠（NPs/CS）在體外緩釋作用明顯，達到72 h。
　　體內藥動學結果表明，IFN各劑型經單側鼓室給藥后都能進入內耳外淋巴（PL）。相比于溶液劑，NPs能在一定程度上增大IFN進入內耳的量和體內滯留時間，其在PL的相對生物利用度是溶液劑的122.4%，MRT由

7、9.1 h延長至10.4 h。將IFN制備成溫敏凝膠能明顯增加藥物在內耳的分布，IFN/P、IFN/CS溫敏凝膠經鼓室注射后在豚鼠PL的生物利用度分別是溶液劑的216.9%、277.0%，其在PL平均滯留時間也分別從9.1 h延長至10.9 h、14.7 h。和IFN凝膠劑相比，NPs凝膠復合制劑能進一步增強藥物在內耳的滯留時間；和IFN/P凝膠相比，NPs/P凝膠在PL的 MRT由10.9 h提升至12.9 h；和IFN/CS凝膠相比

8、，NPs/CS凝膠在PL的 MRT由14.7 h升高到23.2 h。兩種凝膠制劑均能作為IFN溶液或NPs的載體，但相比于泊洛沙姆，藥物載入殼聚糖凝膠經鼓室注射后在體內滯留時間更長。
　　綜上所述，本研究結果表明，將蛋白藥物IFN制備成納米和凝膠制劑及其復合釋藥系統(tǒng)，不僅能延長藥物的釋放時間，還能將藥物有效輸送至內耳 PL，顯著提高藥物在內耳的局部生物利用度。相比于泊洛沙姆凝膠，CS/β-GP凝膠在體內外的緩釋效果更佳；將IFN制