五味子醇甲對糖尿病勃起功能障礙大鼠勃起功能及平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化蛋白影響的研究.pdf

1、目的:通過觀察平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化標志蛋白在大鼠陰莖海綿體表達明確糖尿病勃起功能障礙大鼠(Diabetes-inducederection dysfunction,DI ED)陰莖海綿體是否存在平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化及表型轉(zhuǎn)化對勃起的影響；應(yīng)用藥物干預(yù)后，探索五味子醇甲對DIED大鼠勃起功能的影響及五味子醇甲與平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化蛋白之間的聯(lián)系。
　　方法:
　　1.篩選DIED大鼠：健康雄性SD大鼠100只(體質(zhì)量200±20g)

2、，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機取88只腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)溶液60mg/kg，余12只為正常對照組(NC)。72h后測定隨機血糖，若血糖＞16.7mmol/L視為糖尿病(DM)大鼠；繼續(xù)飼養(yǎng)8周，DM大鼠皮下注射阿撲嗎啡(APO)，30min內(nèi)未誘導(dǎo)陰莖勃起，視為糖尿病勃起功能障礙(DIED)大鼠；若出現(xiàn)勃起，視為單純DM組大鼠。
　　2.模型分組及藥物干預(yù)：將DIED大鼠隨機分為DIED組；五味子醇甲低劑量組(5mg/kg/d

3、)；五味子醇甲中劑量組(10mg/kg/d)；五味子醇甲高劑量組(20mg/kg/d)；另有NC組和DM組共6組；NC組、DM組、DIED組分別予以生理鹽水2ml/d灌胃8周，3個劑量藥物組予以相應(yīng)劑量五味子醇甲灌胃8周，每日1次。
　　3.灌胃8周后麻醉大鼠，電刺激大鼠陰莖海綿體神經(jīng)檢測陰莖海綿體內(nèi)壓(ICP)、頸動脈內(nèi)壓(MAP)。
　　4.取血測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、血

4、肌酐(Scr)水平。
　　5.斷頭處死，取陰莖海綿體組織，一部分用免疫組化法觀察陰莖海綿體內(nèi)平滑肌肌動蛋白-α(SMA-α)水平；另一部分用Western Blot測定陰莖海綿體內(nèi)SMA-α，骨橋蛋白(OPN)蛋白表達水平。
　　6.數(shù)據(jù)分析：所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS23.0軟件分析，數(shù)據(jù)描述用均數(shù)±標準差(±s)表示。對正態(tài)分布的計量資料組間比較采用方差分析，多個樣本均數(shù)間的多重比較采用LSD、SNK-q檢驗。以P<0.05認

5、為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠體質(zhì)量及血糖變化：與NC組相比，灌胃前DM組、DIED組，低、中、高劑量藥物組大鼠體質(zhì)量均明顯下降，血糖顯著增高(P＜0.05)；除 NC組外，上述各組間兩兩相比，大鼠體質(zhì)量及血糖無顯著差異(P＞0.05)。灌胃8周后，DM組、DIED組，低、中、高劑量藥物組大鼠體質(zhì)量均明顯下降，血糖顯著升高(P＜0.05)，除NC組外，上述各組間兩兩相比，大鼠體質(zhì)量及血糖無顯著差異(P＞0

6、.05)。
　　2.電刺激前，各組間的基礎(chǔ)ICP無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；電刺激時，各組間MAP值無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05);電刺激時，與NC組相比，DM、DIED組大鼠ICP及ICP/MAP依次遞減(P＜0.05)；與DIED組相比，低劑量藥物組ICP及ICP/MAP無明顯改變(P＞0.05)，中、高劑量藥物組ICP及ICP/MAP依次遞增(P＜0.05)，高劑量藥物組上升幅度最大。
　　3.各組大鼠間 ALT、AS

7、T、ALP及Scr水平均無明顯差異(P>0.05)
　　4.免疫組化結(jié)果如圖所示，與NC組比較，SMA-α在DM組、DIED組表達依次遞減(P＜0.05)；與 DIED組比較，SMA-α在低、中、高劑量藥物組表達依次遞增(P＜0.05)，且不同劑量藥物組SMA-α表達均低于NC組(P＜0.05)。
　　5.Western Blot結(jié)果
　　SMA-α蛋白表達：與NC組相比， DM組和DIED組陰莖海綿體中SMA-α蛋白

8、含量減少(P<0.05)，其中DIED組SMA-α蛋白含量最少(P<0.05)；與DIED組相比，低、中、高劑量藥物組SMA-α蛋白含量均高于DIED組(P<0.05)，其中高劑量藥物組SMA-α含量最高，中劑量組次之，再者為低劑量組；不同劑量藥物組蛋白含量均低于NC組(P<0.05)。
　　OPN蛋白表達：與NC組相比，DM組和DIED組陰莖海綿體中OPN蛋白含量增多(P<0.05)，其中DIED組OPN蛋白含量最多(P<0.0

9、5)；與DIED組相比，低、中、高劑量藥物組OPN蛋白含量均低于DIED組(P<0.05)，但不同劑量藥物組間兩兩比較OPN蛋白表達無明顯差異(P＞0.05)；DM組陰莖海綿體中OPN蛋白含量是除NC組外最低者(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.DIED大鼠陰莖海綿體可能存在平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化；隨表型轉(zhuǎn)化程度不同可能造成勃起功能障礙。
　　2.五味子醇甲干預(yù)后可以改善DIED大鼠勃起功能；五味子醇甲提高勃起功能的作