高寒草甸生態(tài)系統(tǒng)小哺乳動物腸道厭氧性單寧降解菌的分離鑒定及其酶學性質(zhì)研究.pdf

1、在青藏高原強紫外、高海拔和低氧寒冷環(huán)境中，多種植物均具有較高水平的次生化合物。單寧是一類多酚類次生化合物，易于和蛋白質(zhì)結(jié)合，形成單寧-蛋白質(zhì)復合物，這些復合物在哺乳動物消化道中很難被降解，因而影響食物的消化和蛋白質(zhì)的有效利用。然而一些胃腸微生物能夠耐受單寧，并且在自然生存情況下產(chǎn)生一系列降解單寧的途徑和機制，使得食物蛋白質(zhì)得以被動物吸收，從而提高食物的利用率。為闡明長期生活在高寒生態(tài)系統(tǒng)不同植被生境中的小哺乳動物對次生化合物的利用對策，

2、本論文以高原鼠兔(Ochotonacurzoniae)、根田鼠(Microtus oeconomus)和高原鼢鼠(Eospalax baileyi)三種高原動物盲腸糞便為實驗材料，通過厭氧培養(yǎng)篩選降解單寧酸的腸道厭氧菌，用分子生物學方法鑒定菌種；測定不同菌株的單寧酶及纖維素酶活力及其酶學性質(zhì)；測定高原鼢鼠腸道單寧降解菌總單寧酶活力的季節(jié)性變化。研究結(jié)果如下：
　　 三種動物盲腸中均含有能夠降解單寧酸的菌株。從高原鼠兔的盲腸糞便中

3、分離出7株降解單寧酸的厭氧菌，分別鑒定為日本腸桿菌(Enterobacter kobei)、產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella sp.)、志賀氏菌屬(Shigella sp.)、痢疾志賀氏菌(Shigella dysenteriae)、弗氏志賀氏菌(Shigella flexneri)以及溶血葡萄球菌(Staphylococcus haemolyticus)；從根田鼠的盲腸中分離出

4、7株降解單寧酸的厭氧菌，分別鑒定為腸桿菌屬(Enterobacter sp.)、泛菌屬(Pantoea sp.)、γ-變形球菌(Gammaproteobacterium)、陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)、痢疾志賀氏菌(Shigella dysenteriae)、溶血葡萄球菌(Staphylococcus haemolyticus)和短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)；從高原鼢鼠的盲腸糞便中分離出4株

5、降解單寧酸的厭氧菌，分別鑒定為鶉雞腸桿菌(Enterococcusgallinarum)、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)、蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)和地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)。
　　 除地衣芽孢桿菌的單寧酶活力顯著高于其他菌株外，三種動物盲腸中的其他單寧降解厭氧菌的酶活力無明顯差別。高原鼠兔、根田鼠和高原鼢鼠腸道單寧降解菌的單寧酶在25-75℃均有很好的穩(wěn)

6、定性。在50℃時，所有菌株均保留對單寧酸90％以上的催化活力。此外，各菌株的單寧酶活力均在pH為6.0時達到最大。
　　 此外，所有菌株均具有纖維素酶活力。除地衣芽孢桿菌外，其他菌株纖維素酶的最適反應溫度均低于60℃，且所有菌株纖維素酶在30-40℃有很好的穩(wěn)定性，酶活力保持在80％以上，在pH6-7范圍內(nèi)有很好的穩(wěn)定性。
　　 在野外生存環(huán)境中，從5月份到8月份，高原鼢鼠腸道單寧酶活力呈現(xiàn)上升趨勢。
　　 以上