補(bǔ)腎活血湯促進(jìn)老年性橈骨遠(yuǎn)端骨折愈合的實(shí)驗(yàn)與臨床研究.pdf

1、目的:
　　在中醫(yī)“腎主骨”以及骨折“瘀去、新生、骨合”理論指導(dǎo)下，探討補(bǔ)腎活血湯促進(jìn)骨折愈合的機(jī)理。通過對目前最新文獻(xiàn)進(jìn)行研究，觀察補(bǔ)腎活血湯對老年性橈骨遠(yuǎn)端骨折的臨床療效，同時(shí)進(jìn)行動物、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)深入探索促進(jìn)骨折愈合的方法，為中醫(yī)藥治療骨缺損、骨折延期愈合或骨不連、骨壞死及骨折長期制動后出現(xiàn)的廢用性骨質(zhì)疏松等難治性骨病提供新思路和理論依據(jù)。
　　方法:
　　一、文獻(xiàn)研究
　　間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal

2、 stem cells，MSCs)是骨折愈合過程中最重要的細(xì)胞基礎(chǔ)，具有強(qiáng)大的自我增殖、多向分化、損傷歸巢、組織修復(fù)能力，由于其可以向成骨、軟骨細(xì)胞分化，促進(jìn)骨折的愈合而成為目前研究的熱點(diǎn)。趨化因子是一類可以趨化細(xì)胞定向遷移的小分子分泌蛋白，近年來發(fā)現(xiàn)趨化因子及其受體具有誘導(dǎo)MSCs向損傷、炎癥、缺血等部位遷移歸巢、參與組織的修復(fù)的作用。因此，歸納、總結(jié)誘導(dǎo)MSCs定向遷移的趨化因子，初步了解其作用機(jī)制，對于探索促進(jìn)骨折愈合的方法具有積

3、極意義。
　　二、實(shí)驗(yàn)研究
　　制備SD大鼠股骨中段骨折模型，補(bǔ)腎活血湯灌胃治療7天、14天、21天后分離、培養(yǎng)骨折端MSCs，經(jīng)免疫熒光，成骨、成脂分化鑒定，傳至第3代采用Transwell體外遷移實(shí)驗(yàn)檢測補(bǔ)腎活血湯對骨折端MSCs體外遷移的影響，Western Blot、qPCR檢測MSCs趨化因子表面受體CCR2的表達(dá)。
　　三、臨床研究
　　按隨機(jī)數(shù)字表法將60例老年性橈骨遠(yuǎn)端骨折患者分為治療組、對照組，

4、骨折復(fù)位、穩(wěn)定固定后，治療組予補(bǔ)腎活血湯內(nèi)服4周，對照組不服中藥，其他治療與治療組保持一致。通過定期X-ray復(fù)查進(jìn)行橈骨遠(yuǎn)端骨折愈合評分(Radius union scoringsystem，RUSS)，確定骨折愈合時(shí)間，骨折愈合后采用Gartland-Werley、PRWE(patient-rated wrist evaluation)評分標(biāo)準(zhǔn)對腕關(guān)節(jié)功能進(jìn)行評價(jià)。
　　結(jié)果:
　　一、文獻(xiàn)研究
　　趨化因子及其受

5、體多渠道的相互作用的方式意味著MSCs在移行的每一階段都受到單個(gè)或多個(gè)趨化因子及其受體的影響，阻斷趨化因子配體與受體結(jié)合這一途徑可導(dǎo)致MSCs移行方向的改變或移動受阻。同時(shí)，我們在許多趨化因子受體激活劑的實(shí)驗(yàn)研究中可以看到，往往單個(gè)趨化因子的激活就能明顯地促進(jìn)MSCs遷移歸巢。因此，明確各種趨化因子在骨折微環(huán)境中是否有表達(dá)以及表達(dá)的規(guī)律如何，不但可以篩選出誘導(dǎo)MSCs向骨折部位定向遷移的關(guān)鍵趨化因子，也可以進(jìn)一步闡明內(nèi)源性MSCs向骨損

6、傷部位定向遷移歸巢促進(jìn)骨修復(fù)的相關(guān)機(jī)制。同時(shí)，如果能夠掌握相關(guān)趨化因子的表達(dá)規(guī)律和作用機(jī)制，運(yùn)用中藥補(bǔ)腎活血湯調(diào)節(jié)相關(guān)趨化因子及其受體的表達(dá)，將為中醫(yī)藥治療骨折、骨缺損，促進(jìn)骨折愈合帶來新的前景。
　　二、實(shí)驗(yàn)研究
　　骨折端MSCs經(jīng)細(xì)胞表面抗原免疫熒光以及成骨、成脂分化能力鑒定，可證實(shí)為間充質(zhì)干細(xì)胞。補(bǔ)腎活血湯治療后第7天、14天，骨折端MSCs體外遷移能力明顯加強(qiáng)，與模型組、對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第21天，骨折

7、端MSCs體外遷移能力有所減弱，與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western Blot、qPCR結(jié)果顯示，補(bǔ)腎活血湯治療第7、14天，MSCs表面受體CCR2表達(dá)均有上升，與模型組、對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第21天，治療組與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　三、臨床研究
　　RUSS評分，第2、4、6周治療組與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，第8周兩組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;治療組（5.18±1.02周）與對照組(5

8、.97±1.02周)骨折愈合時(shí)間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Gartland-Werley評分，治療組(6.18±2.70)與對照組(8.03±2.18)兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;PRWE評分，治療組(14.61±4.18)與對照組(18.72±3.84)，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　一、多種趨化因子及其受體的結(jié)合可以誘導(dǎo)MSCs的遷移歸巢從而參與骨折的損傷修復(fù)，研究其表達(dá)規(guī)律及其作用機(jī)制，對于探索促進(jìn)骨折愈