兩株耐堿放線菌的次生代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、嗜堿菌是極端微生物中的一類,長期應對惡劣的生存環(huán)境,其必定會擁有獨特的生理功能和代謝途徑,產(chǎn)生普通微生物所不能產(chǎn)生的活性物質。但是目前對嗜堿菌和耐堿菌次生代謝產(chǎn)物的研究卻鮮有報道。為了尋找結構新穎的活性化合物,本論文采用化學和活性相結合的集成篩選法,開展了對耐堿放線菌次生代謝產(chǎn)物的研究工作。內容包括:海洋放線菌和真菌的分離,耐堿放線菌的篩選及初步評價,天才菌株的獲得及堿調節(jié)對其次生代謝產(chǎn)物的影響,活性成分的分離純化,單體化合物的結構解析

2、,單體化合物活性的初步評價。
　　從青島泥樣和海南植物樣品中分離得到了42株微生物。采用SRB和MTT法,以小鼠白血病細胞P388、宮頸癌細胞Hela、人白血病細胞HL-60為篩選模型對分離得到的菌株和沙漠菌株進行細胞毒活性的篩選,然后用平板打孔法,進行抑菌活性的篩選,再結合HPLC指紋圖譜及薄層色譜進行化學篩選,得到2株“天才菌株”-YIM80379和MBRL-204,并對其進行深入研究。YIM80379進鑒定為擬諾卡氏菌Noc

3、ardiopisis alkaliphila sp.nov.,MBRL-204為鏈霉菌Streptomyces sindenensis。
　　在考察了不同條件堿脅迫對這兩株菌的次生代謝的影響后,對其分別進行了大規(guī)模發(fā)酵,對發(fā)酵產(chǎn)物運用了萃取,薄層層析,正相、反相硅膠柱層析,LH-20凝膠柱層析,反相高壓液相等多種化學的分離純化手段,從Nocardiopisisalkaliphila sp.nov.YIM80379的次生代謝產(chǎn)物中分

4、離得到6個單體化合物(1-6),從Streptomyces sindenensis MBRL-204的次生代謝產(chǎn)物中分離得到17個單體化合物(7-23)。繼而,利用理化性質和波譜學方法(IR,UV,MS,NMR等)結合化學反應闡述了23個化合物的化學結構(化合物結構及名稱參見Table1),其中新化合物3個。所得化合物的結構類型包括:2-吡喃酮類(1,2)、吩嗪類(7,8)、二酮哌嗪類(17-21)、喹啉酮類(9-16)、其他類(3-6

5、,22,23)。
　　利用SRB法、MTT法對化合物進行了細胞毒活性測試,化合物7和8對A549細胞有中等程度抑制活性。用Kirby-Bauer紙片擴散法對部分單體化合物的抗菌活性進行了初步評價,結果表明:化合物1、2、7-16和23分別對金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、銅綠假單孢菌、產(chǎn)氣桿菌以及白色念珠菌表現(xiàn)出不同程度的抑制作用。
　　綜上,本文對兩株耐堿放線菌的次生代謝產(chǎn)物進行了系統(tǒng)研究,共分離鑒定了23個化合物,包括新2-吡