溫度敏感殼聚糖-接枝-NIPAAm-VL共聚物轉(zhuǎn)基因載體.pdf

1、本論文主要研究了溫度敏感殼聚糖(CS)-接枝-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)/月桂酸乙烯酯(VL)共聚物(PNVLCS)的制備，及其與DNA形成聚電解質(zhì)復(fù)合物的性質(zhì)以及此復(fù)合物介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染，主要內(nèi)容包括以下三個(gè)方面：1)對(duì)殼聚糖進(jìn)行改性，制備出溫度敏感殼聚糖-接枝-NIPAAm/VL共聚物，并以多種手段考察PNVLCS的物化性能。通過紅外光譜和1HNMR譜確認(rèn)共聚物的結(jié)構(gòu)，并以GPC測(cè)定產(chǎn)物的分子量，濁度法和DSC實(shí)驗(yàn)揭示共聚物水溶液

2、具有溫度響應(yīng)性，LCST大約為26℃。 2)通過多種物理化學(xué)方法對(duì)共聚物PNVLCS/DNA復(fù)合物進(jìn)行研究，考察PNVLCS與DNA的相互作用、復(fù)合物中DNA的構(gòu)象變化和復(fù)合物的粒徑以及溫度對(duì)其的影響。通過31PNMR譜和圓二色譜的分析得知，DNA在與載體形成聚電解質(zhì)復(fù)合物時(shí)引起價(jià)鍵的微小擾動(dòng)，DNA由B型構(gòu)象轉(zhuǎn)變?yōu)镃型構(gòu)象，PNVLCS傾向于結(jié)合到DNA的小溝區(qū)域。變溫UV和變溫CD實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在溫度升高跨越LCST時(shí)，載體發(fā)生

3、相轉(zhuǎn)變使得與DNA之間的相互作用加強(qiáng)，結(jié)合更加緊密。對(duì)PNVLCS/DNA復(fù)合物的TEM的觀測(cè)和動(dòng)態(tài)光散射測(cè)試表明，DNA復(fù)合物的粒徑因電荷比的不同而異，在高電荷比時(shí)可形成尺寸較小的納米尺度顆粒，復(fù)合物的形態(tài)基本呈現(xiàn)均一的小球狀。復(fù)合物的電泳實(shí)驗(yàn)揭示，PNVLCS可與DNA形成復(fù)合物，相比較而言，37℃條件下形成的復(fù)合物更穩(wěn)定，能夠更顯著地限制DNA的移動(dòng)。 3)以C2C12小鼠成肌細(xì)胞為宿主細(xì)胞，以殼聚糖和共聚物PNVLCS為