外文翻譯--海洋沉積物中產生的l-谷氨酰胺酶的選擇性分離和分子鑒定(中文）

1、中文 中文 3483 字海洋沉積物中產生的 海洋沉積物中產生的 L- L-谷氨酰胺酶的選擇性分離和分子鑒定 谷氨酰胺酶的選擇性分離和分子鑒定Kiruthika J. 和 Saraswathy N.1.政府科技學院，哥印拜陀-641013 ，泰米爾納德邦，印度2.庫瑪拉格魯科技學院，哥印拜陀-641049，泰米爾納德邦，印度出處： 出處：Research Journal of Biotechnology Vol. 8 (8) August

2、 (2013)摘要： 摘要：L-谷氨酰胺酶（L-谷氨酰胺水解酶 E.C.3.5.1.2）是一種催化 L-谷氨酰胺裂解成 L-谷氨酸和氨的酶。由于其潛在的應用作為抗癌和風味增強劑，它已經得到了重視。為了分離出一株有生產潛力的 L-谷氨酰胺酶菌株，印度喀拉拉邦和泰米爾納德邦不同河岸的土壤樣品被收集起來。幾株菌種中，基于酶的活性，一株有效的分離菌被選擇和確定了下來。形態(tài)學和生化特征顯示，有效的分離菌屬于弧菌屬。此外，有效菌株的 16s rRN

3、A 基因（1.4Kbp）被擴增，分析表明大約有 99%的相似性弧菌。IMSF-06（NCBI登錄號 GQ907023）和下一個同源性弧菌是 Azureus；HNS029（NCBI 登錄號JN128263）。因此，該菌株最終鑒定為弧菌 Azureus JK 79 菌株（GenBank 登錄號JQ820323）。關鍵詞： 關鍵詞：L-谷氨酰胺酶，分離，鑒定，16s rDNA 序列分析，弧菌 Azureus JK 79。引言 引言L-谷氨酰胺

4、酶（L-谷氨酰胺水解酶 E.C. 3.5.1.2）催化谷氨酰胺水解成 L-谷氨酸和氨。它是各種含氮代謝中間體合成的關鍵酶。L-谷氨酰胺酶是由不同的細菌，真菌，酵母，霉菌和絲狀真菌合成的。這種酶參與微生物的谷氨酰胺代謝。哺乳動物也合成這種參與到以谷氨酰胺為主要呼吸燃料產生能量的酶。因此，許多類型的腫瘤細胞以及積極分裂的正常細胞表現(xiàn)出對谷氨酰胺高幾率的利用。L- L-谷氨酰胺酶的分離富集與篩選： 谷氨酰胺酶的分離富集與篩選：一克土壤樣品懸浮

5、在100毫升的水，讓它在孵化器和振動混合井（100轉，37℃）對土壤沉積物完全混合30分鐘。約1毫升的上清液稀釋在無菌海水和0.1毫升鋪在最小的谷氨酰胺瓊脂（MGA）培養(yǎng)基上面。MGA 的成分（克／升）包括0.5的氯化鉀；0.5硫酸鎂；1磷酸二氫鉀；0.1硫酸亞鐵；0.1硫酸鋅；10的谷氨酰胺，0.12苯酚紅與放線菌酮（20µ 克/毫升）。L-谷氨酰胺作為唯一的碳源和氮源，酚紅作為 pH 指示劑和抗生素的放線菌酮抑制真菌生長。

6、平板在37℃下培育48小時。只有合成 L-谷氨酰胺酶的細菌能生長在 MGA 培養(yǎng)基上，細胞外產生的 L-谷氨酰胺酶在粉色菌落周圍形成區(qū)被發(fā)現(xiàn)。單菌落被選擇并且培育在谷氨酰胺瓊脂培養(yǎng)基內。目前工作中的所有培養(yǎng)基都和含有3‰鹽的海水混合制備了。十七種形態(tài)不同的菌株被選擇并且 L-谷氨酰胺酶活性被測定。酶的測定： 酶的測定：對17種菌株，通過 Imada et al 方法測定 L-谷氨酰胺酶的活性。不同菌株在37℃和180轉下培養(yǎng)24小時然后

7、放在10000轉離心機上離心20分鐘，取上清液用于酶測定。0.5毫升的樣品和0.5毫升0.4M 的 L-谷氨酰胺溶液等分混合在0.5毫升蒸餾水和0.5毫升的磷酸緩沖液中。該混合物在37℃下反應30分鐘，反應完后加入0.5毫升1.5M 的三氯乙酸。0.1毫升混合物中，加入3.7毫升蒸餾水和0.2毫升的內斯勒氏試劑。吸光度測量在450nm 處用紫外可見分光光度計。釋放的氨含量的測定和一個國際單位的 L-谷氨酰胺酶被定義為在最佳條件下釋放1微

8、摩爾氨所需要的酶量。酶的產率表示為單位/毫升（U /毫升）。表型和生化鑒定： 表型和生化鑒定：形態(tài)分析，如紋理，顏色和強有力的設計邊緣被確定。生化特性試驗是根據伯杰系統(tǒng)細菌學手冊進行的。分離株的分子特征： 分離株的分子特征：基因組的 DNA 通過使用鉻的基因組 DNA 提取試劑盒（RKT09)從培養(yǎng)的 Est 1菌株中被分離并且步驟是根據制造協(xié)議進行的.引物16s FP 5'-AGAGTRTGATCMTYGCTWAC-3'