非洲爪蟾晶狀體再生過程中Pax6與Six3的表達(dá)研究.pdf

1、以非洲爪蟾（Xenopus laevis）蝌蚪為實(shí)驗(yàn)材料，應(yīng)用免疫熒光、WesternBlot和qRT-PCR方法研究非洲爪蟾晶狀體再生過程中Pax6與Six3的表達(dá)。免疫熒光結(jié)果表明，在晶狀體再生過程中，手術(shù)后第3天，角膜愈合處變厚且Pax6表達(dá)；手術(shù)后第7天，再生出柱狀細(xì)胞形成的囊狀結(jié)構(gòu)與角膜相連，此時(shí)Pax6在內(nèi)外角膜和囊狀結(jié)構(gòu)處有表達(dá)，Six3在囊狀結(jié)構(gòu)和外角膜處表達(dá)；手術(shù)后第14天，晶狀體開始纖維化，Pax6在外角膜處有表達(dá)，

2、Six3在晶狀體上皮和外角膜處有表達(dá)；手術(shù)后第21天，晶狀體持續(xù)纖維化且開始透明；手術(shù)后第30天，晶狀體結(jié)構(gòu)再生基本完成，晶狀體上皮處Pax6與Six3有表達(dá)。在晶狀體摘除后不同時(shí)間Pax6與Six3在視網(wǎng)膜中都有表達(dá)，且表達(dá)位置穩(wěn)定，Pax6表達(dá)位置主要在外網(wǎng)層，而Six3主要在節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層和外核層中表達(dá)。Western blot結(jié)果表明，與正常對照組相比，Pax6在晶狀體摘除后3天、7天、21天、30天的表達(dá)差異極顯著；Six3

3、在晶狀體摘除后0天、30天的表達(dá)差異顯著，而3天、21天的表達(dá)差異極顯著。qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Six3mRNA在晶狀體再生不同時(shí)期的表達(dá)，正常對照組與7天組Six3表達(dá)差異顯著，而正常對照組與3天、14天、21天、30天組Six3表達(dá)差異極顯著。
　　以上實(shí)驗(yàn)通過組織學(xué)染色和熒光成像進(jìn)一步證明了非洲爪蟾晶狀體再生經(jīng)歷了角膜上皮細(xì)胞去分化、晶狀體囊形成、晶狀體纖維化過程，然后形成具有透明結(jié)構(gòu)的晶狀體。Western blot