版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、通過與靈芝發(fā)酵實現(xiàn)人參提取物殘渣中人參皂苷的生物轉(zhuǎn)化摘要摘要人參和靈芝都是有價值的傳統(tǒng)中藥,并被許多亞洲國家廣泛應(yīng)用于功能性食品和傳統(tǒng)藥物中。人參在提取后產(chǎn)生了數(shù)量巨大的人參殘渣。這些殘渣中包含有很多具有生物活性的化合物,如人參皂苷。本研究目的就是重新使用本研究目的就是重新使用西洋參的提取物殘渣作為靈芝的發(fā)酵培養(yǎng)基以生產(chǎn)具有生物活性的、富含生物西洋參的提取物殘渣作為靈芝的發(fā)酵培養(yǎng)基以生產(chǎn)具有生物活性的、富含生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的人參皂苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物
2、的人參皂苷。文章主要分析了發(fā)酵階段人參皂苷在發(fā)酵產(chǎn)物中的變化。我們的結(jié)果表明,在發(fā)酵30天之后,人參皂苷Rg1Rd)和化合物CK的含量顯著增加,尤其是人參皂苷Rd;而其它人參皂苷(ReRb1和Rc)在發(fā)酵過程中有所減少。人參皂苷Rd是最后發(fā)酵產(chǎn)物中主要的人參皂苷。此外,人參皂苷的生物轉(zhuǎn)化是發(fā)酵過程中主要的反應(yīng)。1引言引言人參是一種珍貴的傳統(tǒng)中藥(TCM),它被廣泛用于治療和健康的推廣應(yīng)用。有記錄表明,人參有益于糖尿病、心血管疾病和癌癥的
3、預(yù)防有益于糖尿病、心血管疾病和癌癥的預(yù)防。在這些具有生物活性的化合物中,人參皂苷是受到重點調(diào)查研究。超過40個人參皂苷被發(fā)現(xiàn),并被分成兩種主要的類型分成兩種主要的類型:原人參二醇(糖苷配基20S原人參二醇)包括人參皂苷Rb1Rb2RcRdRg3.化合物CK和Rh2以及原人參三醇(糖苷配基20S原人參三醇)包括人參皂苷ReRfRg1Rg2和Rh1。人參皂苷的種類和數(shù)量受到物種,年齡,收獲季節(jié),加工方法和生長條件的影響。因此,人參皂苷的人參
4、皂苷的成分是確定人參種類和質(zhì)量的主要指數(shù)成分是確定人參種類和質(zhì)量的主要指數(shù)。例如,在西洋參中,Rb1Rg1的比率要高于亞洲參。盡管人參皂苷擁有多種生物學(xué)活性,但是對它的吸收和生物活性的利用度對它的吸收和生物活性的利用度卻非常低卻非常低。Rb1RgRg3Rg1Re和CK的生物活性可利用度分別為1.18%,2.36%,2.63%,6.06%,7.06%和35%。人參皂苷低的生物活性可利用度之所以低可能歸因于其較低的膜滲透性以及其在胃腸道中容
5、易被破壞。一些研究表明:人參皂苷人參皂苷Rb1能夠被轉(zhuǎn)化為能夠被轉(zhuǎn)化為Rd、Rg3、CK或者或者Rh2。這類代謝產(chǎn)物比Rb1擁有更高的生物活性和更高的生物可利用度擁有更高的生物活性和更高的生物可利用度。因此把主要的人參皂苷Rb1轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌^少的具有較高生物活性和較高生物可利用度的人參皂苷是非常有必要的。靈芝是一種很受歡迎的中國傳統(tǒng)藥用蘑菇,也是一種白色腐生的擔(dān)子菌類。靈芝由于其具有藥物活性,免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤活性一直被人們所研究。靈芝的這
6、種有益健康的效果可能是因為其所含有的生物活性化合物,如多糖和萜類化合物。除了對健康的影響外,靈芝也具有降解木質(zhì)素,纖維素和半纖維素降解木質(zhì)素,纖維素和半纖維素的能力,這是因為其能夠合成相關(guān)的酶(比如修飾木質(zhì)素的酶)。許多研究表明:人參皂苷RdRg3和CK擁有更多的藥用活性,但是其在人參中的含量比Rb1要低的多。因此,研究一直集中在Rb1(主要的人參皂苷)轉(zhuǎn)化成含量較少的人參皂苷上。轉(zhuǎn)化方法主要包括,加熱,酸或堿的水解,酶的轉(zhuǎn)化和微生物的
7、轉(zhuǎn)化?;瘜W(xué)轉(zhuǎn)化方法通常選擇性低,效率低,環(huán)境的不適宜選擇性低,效率低,環(huán)境的不適宜以及會消除生物活性以及會消除生物活性。從植物和微生物中提取的原油或者純化酶也被應(yīng)用到人參皂苷的轉(zhuǎn)化中。它們在溫和的反應(yīng)條件下具有較好的環(huán)境相容性并具有較高的選擇性。然而目前所采用的酶在工業(yè)使用時穩(wěn)定性不高穩(wěn)定性不高。微生物轉(zhuǎn)化由于其低成本,環(huán)保以及良好的大規(guī)??稍偕a(chǎn)性而具有一定優(yōu)勢。因此,微生物發(fā)酵是大多數(shù)理想的工業(yè)應(yīng)用。0.8mlmin的乙腈。溶劑濃度
8、梯度最初為79%的A和21%的B,然后依次提高B的濃度,6分鐘時提高至22%,7分鐘時23%,25分鐘時25%,30分鐘時32%,35分鐘時50%,50分鐘時65%,51分鐘時提高至100%并維持至61分鐘。柱溫維持在30C,檢測的波長是203nm。每種人參皂苷的鑒別確認都是用HPLC二級質(zhì)譜(液質(zhì)聯(lián)用)方法進行檢測分析。2.5人參皂苷人參皂苷Rd的鑒別的鑒別用質(zhì)譜儀對人參皂苷Rd進行二級質(zhì)譜的分析鑒別。ESI(電噴霧分離)在正離子化模
9、式下進行分離,源級電壓5(kv)鞘氣體流率:8.0(arb),輔助氣體流率:0.10(arb),毛細管電壓:5.98(V)毛細管溫度:272.36(C)。2.6人參殘渣及其發(fā)酵產(chǎn)物中人參皂苷的定量人參殘渣及其發(fā)酵產(chǎn)物中人參皂苷的定量人參發(fā)酵產(chǎn)物中人參皂苷的定量分析需要把內(nèi)標物與樣品標準液進行合并,并基于吸收峰的面積和濃度的比值繪制出標準曲線。100μM的地高辛被選為內(nèi)標物,放置在甲醇中。每種人參皂苷標準樣Rg1ReRb1RcRg3CKR
10、h2的濃度范圍是0.25–400μM,Rd的濃度范圍是2.5–400μM,它們要分開準備,然后與地高辛混合成最終濃度為60μM的溶液。校準曲線通過每個標準的峰面積(以As計)內(nèi)標峰面積(以Ai計)與標準濃度(Cs)內(nèi)標物濃度(Ci)的比率,以μM為單位濃度作圖。所得數(shù)據(jù)在微軟Excel軟件中做線性回歸分析。每個人參皂苷的回歸方程是:Rg1:y=0.8685x0.0282(0.25–400μMR2=0.999)Re:y=0.8912x0.
11、03(0.25–400μMR2=0.999)Rb1:y=0.8574x0.0463(0.25–400μMR2=0.999)Rc:y=0.5175x0.0362(0.25–400μMR2=0.999)Rd:y=0.5028x0.018(2.5–400μMR2=0.999)Rg3:y=0.8999x0.0281(0.25–400μMR2=0.999)CK:y=0.5986x0.0265(0.25–400μMR2=0.999)和Rh2:y=0
12、.9583x0.0378(0.25–400μMR2=0.999)。用線性回歸方程,每個人參皂苷的含量都可以從吸收峰中計算得出。2.7測定限和檢出限的確定測定限和檢出限的確定檢測限(LOD)和測定限(LOQ)都是由準備的每個人參皂苷低濃度的標準樣所確定的在HPLC分析之后,數(shù)據(jù)提交到微軟Excel軟件中進行線性回歸分析。每個人參皂苷的回歸方程都能獲得(yi=mxib),每個人參皂苷的LOD和LOQ值都可以用以下兩個公式計算得出:Sy=√Σ
13、(yimxib)2n2和sb=SyΣxi2n(Σxi2)(Σxi)2.LOD和LOQ值分別被確定為3.3xSbm和10xSbm。2.8再現(xiàn)性的確定再現(xiàn)性的確定為了評估用HPLC的方法分析人參皂苷的再現(xiàn)性,日內(nèi)和日間的測定主要是通過分析不同濃度(2.510和50μm)的人參皂苷標準樣。日間檢測(一天加樣六次),日內(nèi)檢測(一天加樣兩次,連續(xù)6天重復(fù))。準確度和精密度用bias%和CV%確定。2.9回收率的確定回收率的確定為了確定回收率,在做
14、完提取和HPLC檢測之后,往人參皂苷粉末(測試組)中分別加入不同量的每種人參皂苷標準物。每個人參皂苷的回收率可以基于下面的公式得出:回收率(%)=(加標后的含量(測試組)標前的含量加標量)x100%。每個人參皂苷的回收率分別為:Rg1是96.730.81%Re是89.373.25%Rb1是84.341.66%,Rc是93.6011.82%Rd是95.099.07%Rg3是87.646.10%CK是93.561.24%以及Rh2是81.0
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
評論
0/150
提交評論