淺談校準(zhǔn)曲線

1、淺談校準(zhǔn)曲線淺談校準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)曲線是描述待測物質(zhì)濃度或量與檢測儀器響應(yīng)值或指示量的校準(zhǔn)曲線是描述待測物質(zhì)濃度或量與檢測儀器響應(yīng)值或指示量的定量關(guān)系的曲線。根據(jù)朗伯定量關(guān)系的曲線。根據(jù)朗伯——比耳定律，一束單色光通過一定厚比耳定律，一束單色光通過一定厚度吸光池的稀溶液時，吸光度與吸光物質(zhì)（被測定的物質(zhì)）的濃度度吸光池的稀溶液時，吸光度與吸光物質(zhì)（被測定的物質(zhì)）的濃度成正比。若以吸光度為縱軸，被測物質(zhì)的含量為橫軸作圖，應(yīng)得到成正比。若以吸光度

2、為縱軸，被測物質(zhì)的含量為橫軸作圖，應(yīng)得到一通過坐標(biāo)原點(diǎn)的直線，這條直線既校準(zhǔn)曲線（工作曲線或標(biāo)準(zhǔn)曲一通過坐標(biāo)原點(diǎn)的直線，這條直線既校準(zhǔn)曲線（工作曲線或標(biāo)準(zhǔn)曲線）。理論上講，自變量被測物質(zhì)的含量與因變量吸光度是呈一次線）。理論上講，自變量被測物質(zhì)的含量與因變量吸光度是呈一次線性函數(shù)關(guān)系，實(shí)際上，兩變量僅有直線趨勢，而且當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性函數(shù)關(guān)系，實(shí)際上，兩變量僅有直線趨勢，而且當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度過大時，直線的上端將無直線趨勢?，F(xiàn)就工作中，校準(zhǔn)

3、曲線的濃度過大時，直線的上端將無直線趨勢?，F(xiàn)就工作中，校準(zhǔn)曲線的繪制，相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)及截距檢驗(yàn)、斜率檢驗(yàn)，談點(diǎn)膚淺認(rèn)識。繪制，相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)及截距檢驗(yàn)、斜率檢驗(yàn)，談點(diǎn)膚淺認(rèn)識。一、校準(zhǔn)曲線的繪制一、校準(zhǔn)曲線的繪制在實(shí)際工作中，不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，用分光光度計(jì)測定在實(shí)際工作中，不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，用分光光度計(jì)測定對應(yīng)的吸光度是個隨機(jī)變量，以吸光度為縱軸，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為對應(yīng)的吸光度是個隨機(jī)變量，以吸光度為縱軸，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫軸，點(diǎn)繪兩

4、變量關(guān)系圖時呈直線趨勢。若所用試劑和蒸餾水等橫軸，點(diǎn)繪兩變量關(guān)系圖時呈直線趨勢。若所用試劑和蒸餾水等含有與標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的物質(zhì)，則標(biāo)準(zhǔn)溶液系列中的零管所對應(yīng)的含有與標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的物質(zhì)，則標(biāo)準(zhǔn)溶液系列中的零管所對應(yīng)的吸光度將不等于零。故繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時，必須考慮基體的影響。吸光度將不等于零。故繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時，必須考慮基體的影響。通常做法是：首先將標(biāo)準(zhǔn)溶液系列所對應(yīng)的吸光度進(jìn)行試劑空白通常做法是：首先將標(biāo)準(zhǔn)溶液系列所對應(yīng)的吸光度進(jìn)行試劑空白校正

5、（系統(tǒng)誤差校正），然后根據(jù)最小二乘法原理進(jìn)行回歸分析，校正（系統(tǒng)誤差校正），然后根據(jù)最小二乘法原理進(jìn)行回歸分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在實(shí)際工作中經(jīng)常遇到標(biāo)準(zhǔn)曲線不成直線的情況，特別是當(dāng)在實(shí)際工作中經(jīng)常遇到標(biāo)準(zhǔn)曲線不成直線的情況，特別是當(dāng)吸光物質(zhì)的濃度較高時，明顯的表現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線向下或向上偏離。吸光物質(zhì)的濃度較高時，明顯的表現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線向下或向上偏離。?求得的兩個回歸方程如下求得的兩個回歸方程如下?表1：y=0.060x0.0136?

6、表2：y=0.060x0.000從以上兩方程可知：兩方程斜率相等，截距不等，表從以上兩方程可知：兩方程斜率相等，截距不等，表1求得求得的截距的截距0.0136表示試劑空白的大小，它是圍繞它的總體均值零表示試劑空白的大小，它是圍繞它的總體均值零呈正態(tài)分布的隨機(jī)變量，是實(shí)驗(yàn)室誤差在呈正態(tài)分布的隨機(jī)變量，是實(shí)驗(yàn)室誤差在y軸上的反映。實(shí)驗(yàn)誤軸上的反映。實(shí)驗(yàn)誤差越小，截距越趨進(jìn)于零，若實(shí)驗(yàn)中存在正的或負(fù)的系統(tǒng)誤差，差越小，截距越趨進(jìn)于零，若實(shí)驗(yàn)中

7、存在正的或負(fù)的系統(tǒng)誤差，則截距也將總是正值或負(fù)值，遇此情況就應(yīng)查明原因消除系統(tǒng)誤則截距也將總是正值或負(fù)值，遇此情況就應(yīng)查明原因消除系統(tǒng)誤差。同時截距值也是校正曲線是否通過坐標(biāo)原點(diǎn)的尺度。差。同時截距值也是校正曲線是否通過坐標(biāo)原點(diǎn)的尺度。3、回歸校準(zhǔn)曲線的斜率檢驗(yàn)、回歸校準(zhǔn)曲線的斜率檢驗(yàn)回歸校準(zhǔn)曲線的斜率檢驗(yàn)即檢驗(yàn)分析方法的靈敏度，方法靈回歸校準(zhǔn)曲線的斜率檢驗(yàn)即檢驗(yàn)分析方法的靈敏度，方法靈敏度是隨實(shí)驗(yàn)條件的變化而變化的。在完全相同的分析條

8、件下，敏度是隨實(shí)驗(yàn)條件的變化而變化的。在完全相同的分析條件下，僅由于操作中的隨機(jī)誤差導(dǎo)致的斜率變化不應(yīng)超出一定的允許范僅由于操作中的隨機(jī)誤差導(dǎo)致的斜率變化不應(yīng)超出一定的允許范圍，此范圍因分析方法的精度不同而異。圍，此范圍因分析方法的精度不同而異。校準(zhǔn)曲線的繪制校準(zhǔn)曲線的繪制校準(zhǔn)曲線是描述待測物質(zhì)濃度或量與檢測儀器響應(yīng)值或指示量校準(zhǔn)曲線是描述待測物質(zhì)濃度或量與檢測儀器響應(yīng)值或指示量的定量關(guān)系的曲線。的定量關(guān)系的曲線。根據(jù)朗伯根據(jù)朗伯——比

9、耳定律，一束單色光通過一定厚度吸光池的稀比耳定律，一束單色光通過一定厚度吸光池的稀溶液時，吸光度與吸光物質(zhì)（被測定的物質(zhì)）的濃度成正比。若溶液時，吸光度與吸光物質(zhì)（被測定的物質(zhì)）的濃度成正比。若以吸光度為縱軸，被測物質(zhì)的含量為橫軸作圖，應(yīng)得到一通過坐以吸光度為縱軸，被測物質(zhì)的含量為橫軸作圖，應(yīng)得到一通過坐標(biāo)原點(diǎn)的直線，這條直線既校準(zhǔn)曲線（工作曲線或標(biāo)準(zhǔn)曲線）。標(biāo)原點(diǎn)的直線，這條直線既校準(zhǔn)曲線（工作曲線或標(biāo)準(zhǔn)曲線）。理論上講，自變量被測物