細(xì)粒棘球蚴Eg95基因的克隆、原核表達(dá)及抗體制備.pdf

1、囊型包蟲病是由細(xì)粒棘球絳蟲的續(xù)絳期幼蟲寄生在宿主的肝、肺等臟器引起的一種嚴(yán)重危害健康的人畜共患寄生蟲病，該病嚴(yán)重影響了我國乃至全世界人類的健康以及畜牧業(yè)的發(fā)展。囊型包蟲病的防治主要是依靠分子疫苗，Eg95基因被公認(rèn)的目前細(xì)粒棘球絳蟲所有抗原基因中最有前途的疫苗候選基因。Eg95疫苗通過在六鉤蚴表面表達(dá)的抗原與抗體和補體一起介導(dǎo)包囊發(fā)生溶解而產(chǎn)生保護(hù)作用，對囊型包蟲病的防治意義重大。由于來自不同地域、不同宿主的Eg存在著差異，出于Eg95

2、疫苗的安全性和有效性的考慮，更為安全和有效的Eg95新疫苗的研發(fā)具有十分重要的意義。 本文利用PCR的方法，擴(kuò)增得到細(xì)粒棘球絳蟲青海株Eg95的全長基因，測序表明該基因序列全長為1262bp，由3個外顯子，2個內(nèi)含子組成，3個外顯子長度分別為70bp、306bp和95bp。Eg95基因開放閱讀框全長為471bp，編碼156個氨基酸。我們測定的Eg95基因序列與以前報道的青海株、澳大利亞株和美國株的Eg95基因序列比較表明，總共只

3、有41個堿基存在差異，其中36處發(fā)生在內(nèi)含子部分，只有5處是發(fā)生在外顯子部分。在氨基酸水平上，它們之間只有2個氨基酸的差異。 利用原核表達(dá)載體pGEX-5X-1，構(gòu)建了含Eg95基因的重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-5X-1/eg95。酶切鑒定后，轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達(dá)菌株BL21中，37℃、0.8mMIPTG條件下誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE電泳顯示在40KD處有一特異性的條帶，質(zhì)譜鑒定和酶聯(lián)免疫吸附鑒定(ELISA)表明在大腸桿菌中成功的表達(dá)