豬圓環(huán)病毒2型(WH株)滅活疫苗的研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）感染是造成斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）的主要原因，其它協(xié)同因素可增強疾病的嚴重程度。目前PCV2已呈全球分布，豬群感染率越來越高。至目前為止，國內(nèi)外的試驗表明，疫苗是預(yù)防此病的主要措施之一，但我國還沒有商業(yè)化的疫苗問世。
　　 本研究利用本實驗室從臨床發(fā)病豬中分離鑒定的增殖滴度高的豬圓環(huán)病毒2型WH株，進行了滅活苗的研究，為我國預(yù)防和控制該病奠定了基礎(chǔ)，具體研究內(nèi)容如下：
　　 1．PC

2、V2滅活苗的制備
　　 豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）WH株同步接種到PK-15細胞懸液中，細胞形成單層后，加入適量300mmol/L D-氨基葡萄糖，于37℃作用30min，棄去D-氨基葡萄糖，加入DMEM維持液繼續(xù)培養(yǎng)48h，收獲病毒，經(jīng)0.3％甲醛滅活后與適量的美國埃索MARCOL52油佐劑，制備滅活苗并進行無菌檢驗及物理性狀檢驗。
　　 2．PCV2滅活苗最小免疫劑量測定
　　 用含105.0TCID50、1

3、06.0TCID50和107.0TCID50等不同抗原含量的疫苗進行豬體免疫和攻毒保護性試驗，通過ELISA方法檢測抗體、攻毒后體溫變化、臨床表現(xiàn)、病毒血癥及病毒在組織中的分布等指標對疫苗免疫效果進行評價。進一步將最小免疫量的滅活苗按1、2、3ml免疫豬，按上述方法進行評價。結(jié)果顯示：①107.0TCID50組免疫豬三周后，ELISA抗體水平達到最高，5頭豬全達到1：80，其中3頭豬達到1：160，2頭達到1：320，而105.0TCI

4、D50和106.0TCID50抗原含量的滅活苗免疫豬后未檢測到特異性抗體。②最小免疫量的滅活苗1ml、2ml、3ml免疫豬均能產(chǎn)生較好的ELISA抗體，但2ml組效果明顯優(yōu)于其它各組。③免疫四周后攻毒，對照組體溫高于免疫組，病毒血癥檢測及病毒DNA在組織中的分布檢測結(jié)果表明該疫苗能夠有效降低豬體的帶毒，但是107.0TCID50抗原含量的滅活苗2ml組效果最佳。
　　 3．PCV2滅活苗免疫效力試驗
　　 用滅活苗2ml

5、免疫豬群，于免疫后1、2、3、4周分別進行攻毒保護性試驗，通過攻毒后體溫變化、臨床表現(xiàn)、病毒血癥及病毒在組織中的分布等指標對疫苗免疫不同時間的效力進行評價。結(jié)果顯示，免疫一周和兩周后攻毒，免疫組和對照組各指標基本沒有差異；免疫三周和四周后攻毒，免疫組均只有兩頭出現(xiàn)病毒血癥及解剖組織檢測到病毒，但對照組每頭都檢測到病毒血癥及解剖組織檢測到病毒。說明該疫苗免疫三周后可以對豬堅強保護。
　　 4．PCV2滅活苗安全性試驗