從山羊草中分離小麥籽粒硬度主效基因突變體的研究.pdf

1、小麥硬度主要由小麥硬度主效基因Puroindoline A (PinA) 和Puroindoline B (PinB) 決定，兩者中任一基因發(fā)生突變或缺失均會對籽粒硬度造成不同的影響。山羊草屬是與小麥屬遺傳關(guān)系最近的小麥野生近緣植物，也是小麥品種改良的重要基因源。為了豐富小麥類作物籽粒硬度基因庫，為我國的小麥品質(zhì)改良工作奠定基礎(chǔ)，本研究對成熟種子中Puroindolines蛋白的分析方法及山羊草中PinA的同源基因進行了分離和分析，主要

2、研究內(nèi)容和方法如下： （1）Puroindoline蛋白電泳分析系統(tǒng)的建立和優(yōu)化：從二倍體、六倍體小麥材料及小麥近緣種粗山羊草成熟種子中提取Puroindoline蛋白，通過實驗對Puroindoline蛋白SDS-PAGE電泳及染色條件進行了優(yōu)化和討論，建立了濃縮膠T（凝膠濃度）為4，C（交聯(lián)度）為2.6，電泳電壓為128V；分離膠T為13.5，C為2.6，電泳電壓240V，分離膠電泳時間1.5h的電泳結(jié)果穩(wěn)定且重復(fù)性好的優(yōu)化

3、的SDS凝膠電泳條件。同時還引進了電泳條帶分析效果更為清晰的尿素凝膠電泳，并對考馬斯亮藍染色（藍染）和硝酸銀染色（銀染）兩種染色方法的染色濃度范圍和染色效果做了比較，并獲得了良好的實驗效果，為小麥中Puroindoline基因的進一步研究奠定了基礎(chǔ)。 （2）山羊草中PinA基因突變體的篩選：根據(jù)已報道的PinADNA序列，設(shè)計了PinA的簡并引物，以山羊草屬（Aegilops）四個組34份材料中的基因組DNA為模板，在優(yōu)化的PC

4、R體系下進行擴增，并對分離出的25個擴增產(chǎn)物進行測序，用DNAstar軟件與GenBank中的序列做比對，結(jié)果表明，7個測序序列與GenBank已有序列完全相同，但材料來源不同；14個序列確定為PinA的新型突變體，它們之間同源性為97.8﹪到100﹪，序列全長均為447bp，除RM0070和RM0072兩種材料的PinA由于點突變使色氨酸結(jié)構(gòu)域(WWKWWK)中的第二個W突變?yōu)榻K止子，及RM0032和RM0051材料中PinA所產(chǎn)生的