GA對大白菜開花的誘導(dǎo)效應(yīng)及利用RNAI技術(shù)獲得晚抽薹轉(zhuǎn)基因大白菜.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文GA對大白菜開花的誘導(dǎo)效應(yīng)及利用RNAI技術(shù)獲得晚抽薹轉(zhuǎn)基因大白菜姓名：夏廣清申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：園藝學(xué)指導(dǎo)教師：何啟偉趙雙宜20050523山東農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文摘要植物生長發(fā)育受遺傳因素和內(nèi)外環(huán)境的影響。兩者共同調(diào)控植物的生長發(fā)育、形態(tài)建成及開花結(jié)實等發(fā)育過程。其發(fā)育過程中不同信號傳導(dǎo)途徑間及它們之間的Crosstalking已被人們認(rèn)識。赤霉素在大多植物中參與成花轉(zhuǎn)變的信號傳導(dǎo)過程，但其具體作用因植物

2、而異，多種情況下可加速成花轉(zhuǎn)變。本研究以冬性不同的兩個大白菜(BrassicaCampestrisLssppekinesis)B17和1039自交系為試材，分別研究了植物成花生理信號(赤霉素)以及成花關(guān)鍵基因(LFY)的表達(dá)調(diào)控及在植物成花轉(zhuǎn)變過程中的作用機理：同時采用RTPCR方法，從大白菜花蕾中克隆了開花關(guān)鍵基因LFY，并構(gòu)建了其雙鏈dsRNA表達(dá)抑制載體。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將其轉(zhuǎn)入冬性較弱的秋大白菜1039中，并對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了形

3、態(tài)學(xué)、生理學(xué)和分子生物學(xué)的研究，主要試驗結(jié)果如下：(1)GA處理后可以使不同生態(tài)型的大白菜開花明顯提前，同時使植物體內(nèi)物質(zhì)代謝、酶活性、DNA甲基化水平和內(nèi)源GA含量發(fā)生了改交，具體表現(xiàn)為：隨GA處理濃度增加，兩個大白菜試材中可溶性總糖、蔗糖、淀粉和可溶性蛋白及內(nèi)源GA含量增加：POD、a淀粉酶活性升高而EST活性變化不明顯；DNA甲基化水平降低。然而大白菜的冬性不同，對GA處理濃度反應(yīng)也不同，在相同的條件下，弱冬性1039大白菜試材開

4、花明顯先于冬性較強的B17大白菜試材，因此對冬性較弱的大白菜，較低的GA處理濃度就可以促進(jìn)其開花。(2)利用Northern雜交和相對定最PCR(RQRTPCR)技術(shù)分析了GA不同處理濃度對大白菜種子、幼苗、花蕾中LFY基因表達(dá)的影響及其與LFYmRNA表達(dá)之間的關(guān)系。結(jié)果表明，LFY基因的mRNA在GA不同處理濃度下均有表達(dá)，并且在一定范圍內(nèi)，其表達(dá)量和GA處理濃度正相關(guān)。表明GA處理后，由于促進(jìn)了大白菜不同發(fā)育階段LFY基因的表達(dá)活

5、性和其表達(dá)量，進(jìn)而促進(jìn)植物開花。(3)通過改變培養(yǎng)基pH值和瓊脂糖濃度，獲得了由大白菜子葉子葉柄誘導(dǎo)胚狀體和不定芽的培養(yǎng)基配方。其分化生長培養(yǎng)基的配方分別為：MS培養(yǎng)基3％蔗糖十45ragL～6BA05mgL～I(xiàn)AA，pH6062，瓊脂糖濃度為10％12％及MS培養(yǎng)基3％蔗糖“5ragL～6BA05mgL～I(xiàn)AA，pH5758，瓊脂糖濃度為08％09％。通過對本實驗供試的三個不同大白菜試材的比較研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)pH值在6062，瓊脂糖濃度在