微囊藻毒素毒性及其致癌機(jī)制.pdf

1、目的：探討微囊藻毒素與人體健康的關(guān)系，深入研究微囊藻毒素毒作用的機(jī)制，檢測(cè)微囊藻毒素的抗TMV活性。
　　 方法：（1）在福清市和永泰縣部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)進(jìn)行2002～2005年回顧性以惡性腫瘤為主的死因調(diào)查，對(duì)其水體微囊藻毒素污染和其它污染物含量進(jìn)行檢測(cè)，分析惡性腫瘤死亡率和水體微囊藻毒素污染間關(guān)系。同時(shí)采用病例對(duì)照研究，收集福州市各大醫(yī)院肝癌確診的新發(fā)病例，并選擇與病例在性別、年齡、民族和居住地相匹配的同期入院的非腫瘤患者為對(duì)照。采用

2、統(tǒng)一編制的調(diào)查表進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查。采用PCR-RFLP法對(duì)調(diào)查對(duì)象的血標(biāo)本進(jìn)行XRCC3、ERCC1基因多態(tài)檢測(cè)。采用廣義線性模型分析飲水類(lèi)型與其它環(huán)境因素、與基因多態(tài)性在肝癌發(fā)生中的交互作用。（2）按照兩階段致癌理論建立微囊藻毒素促癌實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，利用HE染色、γ-GT染色來(lái)判斷動(dòng)物模型建立情況，并應(yīng)用免疫組化、RT-PCR、PCR-SSCP、分子克隆、基因測(cè)序等技術(shù)來(lái)研究微囊藻毒素促癌過(guò)程中對(duì)癌基因和抑癌基因表達(dá)與調(diào)控影響。（3）采用葉

3、碟法對(duì)微囊藻純毒素（MC-LR）抑制TMV復(fù)制活性進(jìn)行測(cè)定。
　　 結(jié)果：（1）福清與永泰水體中微囊藻毒素陽(yáng)性檢出率為28.4％。溝塘水微囊藻毒素陽(yáng)性率最高為41.7％，不同水體類(lèi)型的陽(yáng)性率從高到低的順序?yàn)椋簻咸了?河水>自來(lái)水>井水，且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；福清微囊藻毒素檢測(cè)陽(yáng)性率為46.5％，顯著高于永泰的陽(yáng)性率11.1％；福清惡性腫瘤的標(biāo)化死亡率是永泰的2倍，其中肝癌、胃癌、食管癌、腸癌、肺癌、膀胱癌標(biāo)化死亡率

4、福清均高于永泰。（2）飲溝塘水、肝炎病毒感染、食用霉變食物是福州地區(qū)肝癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素。飲溝塘水與其他因素間存在交互作用。飲溝塘水與肝炎病毒感染之間交互作用為超相加模型，與食用霉變食物之間交互作用為超相乘模型，三個(gè)環(huán)境因素交互作用為超相加模型。ERCC1基因8092位點(diǎn)突變能增加患肝癌的危險(xiǎn)度，與飲溝塘水的交互作用為次相乘模型，說(shuō)明遺傳因素與環(huán)境因素間存在交互作用，基因突變會(huì)增加個(gè)體對(duì)環(huán)境暴露的易感性。（3）微囊藻毒素LR（MCLR）在

5、促大鼠肝癌過(guò)程中能增加γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）陽(yáng)性率，二乙基亞硝胺（DEN）+微囊藻純毒素（MC）組γ-GT染色的陽(yáng)性率為100％，而DEN對(duì)照組的陽(yáng)性率22.22％，兩者差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。MCLR可提高反映染色體損傷畸變情況的指標(biāo)-微核率。DEN+MC組微核率為13‰，顯著高于其他各組（P<0.05）。（4）MCLR在促大鼠肝癌過(guò)程中能增加大鼠肝臟BCL-2、PCNA基因蛋白表達(dá)強(qiáng)度，同時(shí)降低大鼠肝臟Bax、p21

6、WAF1基因蛋白表達(dá)強(qiáng)度。Bcl-2與PCNA蛋白表達(dá)強(qiáng)度在DEN+MC組分別為0.0377和0.0088，顯著高于表達(dá)強(qiáng)度分別為0.0205和0.0033的DEN對(duì)照組（P<0.05）；Bax與p21WAF1蛋白表達(dá)強(qiáng)度在DEN+MC組分別為0.0073和0.0058，顯著低于表達(dá)強(qiáng)度為0.0244和0.034的DEN對(duì)照組（P<0.05）。（5）MCLR在促大鼠肝癌過(guò)程中能顯著增加大鼠肝臟Bcl-2和p53mRNA表達(dá)強(qiáng)度。這兩種基

7、因在DEN+MC組表達(dá)強(qiáng)度分別為2.244和2.5719，顯著高于其他各組（P<0.05）。而。Bax、p21WAF1、p16的mRNA表達(dá)強(qiáng)度各組間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（6）微囊藻毒素可引起p53基因突變，本次實(shí)驗(yàn)在DEN+MC組篩查出4例突變陽(yáng)性者，該組突變率為26.6％（4/15）。測(cè)序結(jié)果顯示：突變分別位于密碼子268（TTT→CTT）3例，編碼的氨基酸由苯丙氨酸（Phe）→亮氨酸（Leu）；位于密碼子283（GA

8、G→GAA）1例，但編碼的氨基酸沒(méi)有改變。Bax基因未篩查到突變。（7）微囊藻毒素對(duì)TMV抑制作用不強(qiáng)，最大抑制率只為46.03％，且抑制作用不隨濃度增加而加強(qiáng)。
　　 結(jié)論：（1）水體富營(yíng)養(yǎng)化引起水體藻類(lèi)毒素污染可能與福清高惡性腫瘤死亡率有關(guān)。（2）飲溝塘水是福州地區(qū)肝癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素。飲溝塘水與其他因素間存在交互作用。（3）微囊藻毒素對(duì)肝癌的發(fā)生具有強(qiáng)的促進(jìn)作用。微囊藻毒素可在基因水平、轉(zhuǎn)錄水平、翻譯水平以及翻譯后水平影響癌