白血病相關(guān)蛋白質(zhì)的晶體學(xué)研究.pdf

1、X-射線晶體學(xué)是測(cè)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的主要手段之一，白血病相關(guān)蛋白質(zhì)的晶體學(xué)研究將有助于深入理解疾病發(fā)生的分子機(jī)理和藥物設(shè)計(jì)。本論文采用X-射線晶體學(xué)的技術(shù)和方法對(duì)兩種白血病相關(guān)蛋白質(zhì)進(jìn)行了研究。 Palladin和myotilin以及myopalladin共同組成一個(gè)含有免疫球蛋白類似結(jié)構(gòu)域的細(xì)胞骨架蛋白質(zhì)亞家族，它們都在調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白重構(gòu)中起到腳手架的作用。Palladin和myopalladin都含有5個(gè)免疫球蛋白類似結(jié)構(gòu)域。為了

2、深入了解palladin的功能，我們對(duì)其C端的免疫球蛋白類似結(jié)構(gòu)域進(jìn)行晶體學(xué)研究，獲得了palladin免疫球蛋白類似結(jié)構(gòu)域3(簡(jiǎn)稱D3AN)的晶體，晶體衍射數(shù)據(jù)分辨率至1.8 A，屬于空間群P2<1>，晶胞參數(shù)為a=40.9A，b=33.3A，c=34.8A，p=90.3°。使用分子置換法解得D3AN的晶體結(jié)構(gòu)，最終Rfactor為22.5％，Rfree為28.4％。 晶體結(jié)構(gòu)顯示，D3AN具有免疫球蛋白超家族結(jié)構(gòu)亞類I-s

3、et的顯著特征。1個(gè)不對(duì)稱單位含有1個(gè)分子。D3AN特征性的表面電荷分布可能具有重要功能，保守的C，D，E-strand以及分子表面的堿性氨基酸可能使palladin和myopalladin的免疫球蛋白類似結(jié)構(gòu)域3共享某種類似的功能；D3AN晶體結(jié)構(gòu)中的多個(gè)分子間結(jié)合區(qū)域提示palladin免疫球蛋白類似結(jié)構(gòu)域3具有相互作用的潛質(zhì)，可能介導(dǎo)與其他蛋白質(zhì)或者結(jié)構(gòu)域之間的相互作用。 HSPC069／HYPB蛋白質(zhì)的SET結(jié)構(gòu)域(AW

4、S-SET-PostSET)介導(dǎo)組蛋白H3第36位賴氨酸特異性的甲基轉(zhuǎn)移酶活性，為了深入了解其作用機(jī)理，我們對(duì)SET結(jié)構(gòu)域進(jìn)行了表達(dá)純化和初步晶體學(xué)研究，在研究中發(fā)現(xiàn)： 氨基酸殘基915-1190的蛋白質(zhì)片斷SET-Full可以結(jié)合DNA，可能對(duì)SET結(jié)構(gòu)域的甲基轉(zhuǎn)移酶功能有輔助作用；SET-Full所結(jié)合的DNA可以通過(guò)分子篩層析與蛋白質(zhì)分離。純化后的蛋白在30％w／v PEG 8000，0.1 M二甲砷酸鈉pH 6.5，0.