?？挡窈闹参飳W(xué)鑒定及RAPD分析.pdf

1、目的：探討?？挡窈煌尤旱倪z傳多樣性和親緣關(guān)系，為我省柴胡的GAP工作的選種育種提供相關(guān)的理論依據(jù)。 方法：從湖北省?？悼h的柴胡GAP示范基地和周邊地區(qū)生長(zhǎng)的四個(gè)居群采集柴胡作為標(biāo)本，每個(gè)居群各隨機(jī)選取3株，同時(shí)采集保康地區(qū)引種的日本三島柴胡1株作為標(biāo)本，各株?？挡窈鷺?biāo)本取根作性狀鑒別和顯微鑒別，檢測(cè)其理化特性和柴胡皂苷含量；取葉片提取總DNA，通過篩選出的7個(gè)10bp隨機(jī)對(duì)所有標(biāo)本進(jìn)行RAPD分析，將所得的PCR產(chǎn)物在瓊脂糖

2、凝膠上電泳并拍照。每個(gè)PCR擴(kuò)增反應(yīng)重復(fù)一次以上，選取可重復(fù)的DNA帶記錄，按瓊脂糖凝膠同一位置上DNA帶的有無進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，有帶(包括弱帶)記為“1”，無帶為“0”。用SPSS13.0計(jì)算出各標(biāo)本之間Jaccard遺傳相似系數(shù)，再用類平均法進(jìn)行聚類分析，并構(gòu)建DNA聚類系統(tǒng)樹圖。 結(jié)果(1)從?？邓膫€(gè)居群柴胡根的形狀、主根是否明顯、分枝多少、葉殘基及莖殘基數(shù)目、表面顏色、皮孔、質(zhì)地、折斷面性狀及根頭環(huán)繞縱紋是否明顯等幾個(gè)方面性狀與

3、藥典記載進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)，?？挡窈c北柴胡較為近似，但在柴胡性狀鑒別中較為重要的根的形狀和分枝數(shù)目上，部分標(biāo)本與記載的有一定差異。且不同居群間在性狀上存在一定差異，同一居群內(nèi)不同個(gè)體之間也存在一定差異。 (2)從保康四個(gè)居群柴胡根橫切面的木栓層和栓內(nèi)層數(shù)目、皮層形狀、油管數(shù)目、韌皮部所占比例、形成層是否明顯、裂隙所在部位、導(dǎo)管數(shù)目和方向、纖維群數(shù)目、木射線及分泌細(xì)胞有無等幾個(gè)方面進(jìn)行比較，認(rèn)為?？挡窈膫€(gè)居群均與北柴胡顯微結(jié)構(gòu)相一

4、致，符合北柴胡特性。同一居群內(nèi)?？挡窈@微結(jié)構(gòu)較為相近，差異相對(duì)較小，不同居群間差異較大。 (3)?？邓膫€(gè)居群的柴胡在加水振搖后均產(chǎn)生持久的氣泡；根的橫切面上滴加濃硫酸和95％乙醇等體積混合液后，觀察發(fā)現(xiàn)四個(gè)居群的反應(yīng)結(jié)果相似：可看到含皂苷部位顏色發(fā)生從黃→黃綠→綠→藍(lán)綠→藍(lán)的變化，顯色部位是在木栓層以內(nèi)到達(dá)次生韌皮部之間?？梢娝膫€(gè)居群?？挡窈睦砘匦暂^為一致，且與北柴胡理化特性相同。 (4)RAPD分析發(fā)現(xiàn)13個(gè)樣本

5、共擴(kuò)增出61個(gè)條帶，其中多態(tài)性條帶58條，占95.1％。引物S500和S2016擴(kuò)增出的條帶中有3條是13個(gè)樣本所共有的。除去三島柴胡所特有的7個(gè)條帶，不同居群間?？挡窈亩鄳B(tài)性條帶占到94.4％。四個(gè)居群內(nèi)部多態(tài)性條帶所占比例分別為GAP33.3％、董家溝(野生)51.3％、董家溝(家種)65.0％、安家灣78.1％，其中GAP柴胡多態(tài)性條帶所占比例最小。 依據(jù)擴(kuò)增的條帶計(jì)算Jaccard相似系數(shù)，三島柴胡與?？挡窈骶尤旱腏

6、accard相似系數(shù)幾乎都在0.3以下，表明其與保康柴胡的遺傳相似性較低。?？挡窈骶尤洪g的Jaccard相似系數(shù)在0.143～0.857之間，保康柴胡不同居群內(nèi)部各標(biāo)本之間相似系數(shù)在0.267～0.857之間，差異較大，其中GAP居群的系數(shù)最大，在0.727～0.857之間。 依據(jù)UPGMA聚類分析形成的聚類圖，GAP居群的三個(gè)標(biāo)本聚為首先一類，然后與安家灣的家種柴胡居群共同構(gòu)成一個(gè)分支；董家溝的野生柴胡居群聚為一類，但遺傳距

7、離明顯大于GAP居群，然后與董家溝家種居群構(gòu)成一個(gè)分支；三島柴胡單獨(dú)聚為一類。 結(jié)論：?？挡窈乃膫€(gè)居群從性狀、顯微結(jié)構(gòu)、理化特性和皂苷含量上均與北柴胡高度近似。聚類圖上分成兩類，這兩類具有明顯的地理隔離帶，提示?？挡窈倪z傳多樣性較大部分來自于種植地理環(huán)境的差異，可能存在種內(nèi)變異。家種居群內(nèi)部遺傳距離較遠(yuǎn)，可能與當(dāng)?shù)厮庌r(nóng)引種時(shí)選種自由性較大有關(guān)。GAP居群與其他居群比較內(nèi)部遺傳距離最小，最先聚在一起，提示我省柴胡GAP工作在選