耐酸生淀粉糖化酶的初步研究.pdf

1、本研究通過對大曲和淀粉廠周圍的土壤樣品進(jìn)行篩選，共篩出能夠直接利用生玉米淀粉的菌種約18株，又通過復(fù)篩獲得8株能夠產(chǎn)生酸性生淀粉糖化酶(在pH3.6，30℃的條件下相對可以較好的水解生玉米淀粉)的菌種，其中MS-09的酶活最高，達(dá)到15.20U/mL，選定為出發(fā)菌株。通過菌落形態(tài)和ITS保守區(qū)序列分析及基于ITS的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析，確定該菌為一株煙曲霉，命名為AspergillusfumigalusMS-09。 通過單因素實(shí)驗(yàn)對A

2、spergillusfumigalusMS-09產(chǎn)酸性生淀粉糖化酶的發(fā)酵條件進(jìn)行研究，確定為：發(fā)酵初始pH7.0，30℃培養(yǎng)92h，裝液量為10％，搖瓶轉(zhuǎn)速為250r/min。該菌產(chǎn)酸性生淀粉糖化酶的最適碳源為2％的玉米粉(干熱滅菌)。Plackett—Burman多因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計法，確定了影響Aspergillus.fumigalusMS-09產(chǎn)酸性生淀粉糖化酶的主要因素為蛋白胨、NaNO3和KH2PO4。進(jìn)一步通過響應(yīng)面分析法和典型性

3、分析得出培養(yǎng)基的最佳組成為：玉米粉(干熱滅菌)20g/L、蛋白胨6.79g/L、KH2PO42.14g/L并1]NaNO327.81g/L，預(yù)測酸性生淀粉糖化酶的最大酶活27.02U/mL。驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)證明在優(yōu)化條件下，Aspergillus.fumigalusMS-09產(chǎn)酸性生淀粉糖化酶達(dá)27.59U/mL。 Aspergillus.fumigalusMS-09產(chǎn)生的酸性生淀粉糖化酶經(jīng)過硫酸銨鹽析、DEAE—纖維素離子交換和Se

4、phadexG—75分子篩純化后，酶的比活力由27.32U/mg提高到了129.67U/mg。對純化后酶的性質(zhì)進(jìn)行了研究發(fā)現(xiàn)，其最適作用溫度為45℃，最適作用pH為5.0，該酶具有很好的耐酸穩(wěn)定性。金屬離子對酶活力的影響研究表明Na+和Ca2+對該耐酸生淀粉糖化酶有激活作用，Hg2+、Fe3+、Zn2+和Cu2+對該酶有抑制作用。HPLC分析了該酶水解生玉米淀粉的產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)葡萄糖是唯一的水解產(chǎn)物。所以該酶是一種耐酸生淀粉糖化酶。