第一部分 半胱氨酰白三烯受體1拮抗劑篩選方法的建立;第二部分 二氫青蒿素抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細胞增殖和誘導凋亡.pdf

1、目的：星形細胞瘤是腦內(nèi)常見的腫瘤,目前沒有十分有效的療法.惡性膠質(zhì)瘤常用外科手術、放療和化療,但預后較差.青蒿素及其衍生物是安全有效的抗瘧疾藥物,近來發(fā)現(xiàn)其具有較好的抗腫瘤作用.能夠選擇性殺傷腫瘤細胞,而對正常細胞毒性很小.二氫青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)是青蒿素在體內(nèi)的主要活性代謝產(chǎn)物,其抗腫瘤活性大于青蒿琥酯和青蒿素.并且,DHA能夠穿過血腦屏障,因而,可能對腦內(nèi)腫瘤的治療有一定作用.我們的實驗是研究DHA

2、對大鼠膠質(zhì)瘤細胞(C6細胞)增殖和凋亡的影響. 方法：在培養(yǎng)的C6細胞,加入DHA 1～125μmol/L作用24、48、72h.以臺盼藍染色計數(shù)和噻唑藍(MTT)還原反應,觀察細胞增殖和活性;以Hoechst 33342染色,觀察細胞凋亡;以H<,2>DCFDA氧化試驗檢測細胞內(nèi)活性氧自由基(reactive oxygenspecies,ROS)變化. 結(jié)果：(1)DHA 5-125μmol/L濃度及時間依賴性抑制C6

3、細胞的增殖,作用48h后的IC<,50>是23.4μmol/L.(2)5μmol/L DHA作用24h時后即可誘導凋亡(P<0.05),48 h后凋亡率可達到30﹪以上(P<0.01);25μmol/L凋亡率接近50﹪.(3)5～125μmol/L增高細胞內(nèi)的ROS(P<0.01),5μmol/L可增加ROS達1倍;25μmol/L可增加2倍左右;125μmol/L增加4倍以上. 結(jié)論： 1.DHA能夠抑制C6細胞增殖,

4、誘導其凋亡,其細胞毒作用與細胞內(nèi)ROS增加相關. 2.DHA能夠殺傷腫瘤細胞,并能穿過血腦屏障,可能成為治療腦內(nèi)膠質(zhì)瘤的有效成分. 目的：半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes,CysLTS)是花生四烯酸經(jīng)5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)途徑代謝產(chǎn)生的重要炎癥介質(zhì),參與外周炎性疾病以及腦卒中、腦外傷、腦腫瘤等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理生理過程.CvsLTs的作用由cysLT<,1

5、>和CysLT<,2>受體介導.已經(jīng)初步證明,CysLTs啟動受體后,通過激發(fā)細胞內(nèi)貯存Ca<'2+>釋放而發(fā)揮效應.我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CysLT<,1>受體參與大鼠和小鼠的腦缺血損傷.CysLT<,1>受體有選擇性拮抗劑,但存在非受體效應,還需要繼續(xù)尋找新的化合物;而對于CysLT<,2>受體尚無選擇性拮抗劑,因此,對其功能了解較少.本研究目的為了建立細胞模型及篩選方法,初篩CysLT<,1>受體拮抗劑,為進一步尋找新的化合物及研制新藥提供

6、基礎. 方法：選用分化后高表達CysLT<,1>受體的人白血病細胞株dU937細胞,激動劑LTD<,4>攻擊后檢測細胞內(nèi)Ca<'2+>濃度變化,作為CysLT<,1>受體拮抗劑的篩選方法,初步篩選有拮抗劑活性的化合物,以cysLT<,1>受體拮抗劑pranlukast和montelukast作為參照;并進一步在人臍靜脈內(nèi)皮細胞缺氧缺糖損傷(OGD)模型上觀察初篩化合物抗損傷作用. 結(jié)果：dU937細胞高表達CysLT<,

7、1>受體蛋白.陽性刺激物ATP 5×10<'-5> M能顯著升高du937細胞內(nèi)鈣(30﹪);LTD<,4> 10<'-7>M的作用約為ATP的56﹪.cysLT<,1>受體拮抗劑pranlukast和montelukast能抑制LTD<,4>誘導的du937細胞內(nèi)鈣升高,IC<,50>分別為9.2×10<'-8>.M和7.5×10<'-8>M.新合成的化合物Dxw.1、10、11、12、13、19也能部分抑制LTD<,4>誘導的鈣信號

8、,IC<,50>在2.2×10<'-8>.M至2.4×10<'-7>M之間,最大抑制率19﹪～23﹪.D<,xw>-10、11、12在10<'-6>M對人臍靜脈內(nèi)皮細胞沒有毒性作用,但也不能抑制OGD引起的損傷;而同濃度pranlukast有保護作用. 結(jié)論： 1.dLl937細胞可以作為CysLT<,1>受體細胞模型;在此細胞上確定了Ca<'2+>測定條件,建立了初步篩選CysLT<,1>受體拮抗劑的方法. 2