糖化酶生產(chǎn)菌次要水解酶的研究.pdf

1、糖化酶是目前重要的工業(yè)酶制劑之一，廣泛應(yīng)用于淀粉加工業(yè)和發(fā)酵工業(yè)中。然而，在目前的糖化酶制劑生產(chǎn)過程中常會伴隨有一種水解酶副產(chǎn)物-α-葡萄糖苷酶的生成，它可以從低聚糖類底物的非還原末端切開α-1，4糖苷鍵，釋放出葡萄糖或?qū)⒂坞x出的葡萄糖殘基轉(zhuǎn)移到另一糖類底物形成α-1，6糖苷鍵，得到非發(fā)酵性寡聚糖。α-葡萄糖苷酶的存在影響了糖化酶制劑的質(zhì)量和純度，給工業(yè)生產(chǎn)帶來不便，因此它越來越受到研究者的重視。
　　 CICIM F0410是

2、生產(chǎn)糖化酶的工業(yè)菌株，本文考察了該菌株產(chǎn)α-葡萄糖苷酶的變化進程與酶學(xué)性質(zhì)，發(fā)現(xiàn)該菌株在發(fā)酵周期96 h時的α-葡萄糖苷酶產(chǎn)量最高；該酶的最適pH值5.0，最適反應(yīng)溫度55℃，0.5 mM的Mg2+對該酶活有較顯著的激活作用，并對其熱穩(wěn)定性有一定的保護作用。
　　 對菌株的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進行了優(yōu)化，在保證糖化酶產(chǎn)量的前提下，最大限度的降低α-葡萄糖苷酶的活力。最佳發(fā)酵培養(yǎng)基組成(g/L):葡萄糖109，豆餅粉25(添加終濃度0

3、.01 M的NH4Cl)，玉米漿31。搖瓶發(fā)酵最佳培養(yǎng)條件:培養(yǎng)基初始pH值5.5，種子培養(yǎng)96 h，接種量9%，旋轉(zhuǎn)式搖床34℃培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速220 r/min，發(fā)酵周期為144 h。通過發(fā)酵條件的優(yōu)化，每1000U糖化酶中α-葡萄糖苷酶的含量降低了53.16%。
　　 利用PCR方法擴增到大小為3124 bp的α-葡萄糖苷酶基因，其中編碼序列長度為2973 bp，含有三段內(nèi)含子，推衍得到該段序列編碼990個氨基酸殘基，其中包