西南地區(qū)17種（33份）不同來(lái)源的野生懸鉤子屬植物種間遺傳多樣性的RAPD分析.pdf

1、我國(guó)西南地區(qū)是懸鉤子屬植物(Rubus L.)的多樣性中心，擁有豐富的種質(zhì)資源，其野生資源在各種抗性、易成活性、果實(shí)風(fēng)味都優(yōu)于從國(guó)外引進(jìn)的栽培品種，具有重要的栽培價(jià)值和育種價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)采用RAPD分子標(biāo)記方法，對(duì)采自西南地區(qū)空心莓組(Sect.Idaeobatus)和木莓組(Seet.Malachobatus)10個(gè)亞組的33份野生懸鉤子屬植物材料進(jìn)行遺傳多樣性分析，以期為合理利用西南地區(qū)懸鉤子屬野生種質(zhì)資源和將我國(guó)特有的懸鉤子屬植物基

2、因資源引入現(xiàn)有優(yōu)良品種，創(chuàng)造出新的適合我國(guó)懸鉤子屬植物生產(chǎn)的優(yōu)良品種提供參考。其試驗(yàn)結(jié)果如下： (1)通過(guò)比較CTAB法、SDS法和核DNA法等三種不同DNA提取方法表明，核DNA法是提取懸鉤子屬植物DNA的一種理想方法，能得到高純度高質(zhì)量的DNA。 (2)從85條引物中篩選出擴(kuò)增效果較好的25條引物用于擴(kuò)增供試材料，所有引物能夠?qū)Σ牧线M(jìn)行有效的分離。得到擴(kuò)增條帶589條，每個(gè)引物擴(kuò)增的DNA帶數(shù)在19～33條之間，平均

3、每個(gè)引物擴(kuò)增23.56條帶，其中多態(tài)性帶580條，多態(tài)性為98.417％，其中16條引物擴(kuò)增的多態(tài)性條帶百分率高達(dá)100％，表現(xiàn)出較高的多態(tài)性。 (3)通過(guò)反復(fù)試驗(yàn)建立的適用懸鉤子屬植物的RAPD技術(shù)最佳反應(yīng)體系為：25~t1.反應(yīng)體系中含模板DNA20ng，10×buffer2.5μL，Mg<'2+>2.0mmol/L，引物0.6μnol/L，dNTPs0.24mmol/L，TaqDNA聚合酶1.5U。 反應(yīng)程序?yàn)椋?

4、4℃預(yù)變性4min；94℃變性1min，36℃退火50sec，72℃延伸2min，45個(gè)循環(huán)；完成最后一個(gè)循環(huán)后，在72℃繼續(xù)延伸10min，然后在4℃保溫。最后用1.5％的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其擴(kuò)增產(chǎn)物。 (4)PCR-RAPD結(jié)果分析表明，我國(guó)西南地區(qū)的野生懸鉤子屬植物遺傳多樣性非常豐富，從分子水平上支持西南地區(qū)是懸鉤子屬起源中心的觀點(diǎn)，且能為擴(kuò)大樹(shù)莓育種范圍提供多種選擇。 (5)遺傳差異分析表明，組和亞組間的進(jìn)化順序

5、與形態(tài)學(xué)標(biāo)記、孢粉學(xué)標(biāo)記和細(xì)胞學(xué)標(biāo)記相吻合，這為研究懸鉤子屬的系統(tǒng)演化提供了分子生物學(xué)依據(jù)。 (6)33份材料可分為9類(lèi)，空心莓組(Sect.Idaeobatus)和木莓組(Sect.Malachobatus)的亞組間交叉聚類(lèi)，表明了野生懸鉤子屬植物遺傳關(guān)系的復(fù)雜性。 供試材料間的遺傳距離(GD)變異范圍為0.1957～0.9088，平均為0.5397。來(lái)源于雅安老板山和張家山的紅泡刺藤(R niveus)遺傳距離最近，