棲息地破碎化背景下黑頸長尾雉保護(hù)遺傳學(xué)研究.pdf

1、黑頸長尾雉（Syrmaticus humiae）屬于世界珍稀瀕危雉類，地理分布狹窄(。)僅分布在中國西南部、泰國北部、緬甸西北部和印度東北部。由于棲息地破碎化和人為捕獵，黑頸長尾雉種群分布范圍和種群數(shù)量不斷銳減，已被列為國家Ⅰ級保護(hù)動物，國際瀕危物種貿(mào)易公約(CITES)附錄Ⅰ，世界保護(hù)聯(lián)盟(IUCN)將其定為近危種(Near Threatened)。本文以分布在廣西-貴州兩省的南盤江和紅水河流域的6縣（隆林縣、西林縣、田林縣、樂業(yè)縣、

2、天峨縣和羅甸縣）的4個黑頸長尾雉地理種群為研究對象，綜合運(yùn)用線粒體DNA和核DNA微衛(wèi)星為分子標(biāo)記，檢測黑頸長尾雉的種群遺傳多樣性和種群遺傳結(jié)構(gòu)，以期為針對該珍稀瀕危物種保護(hù)策略的制定提供科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1、通過磁珠富集法構(gòu)建了黑頸長尾雉微衛(wèi)星文庫，共篩選出12對具有多態(tài)性的微衛(wèi)星引物。利用這12對微衛(wèi)星引物對來自天峨縣的16個黑頸長尾雉個體樣品DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測序和分型。結(jié)果表明，12對引物擴(kuò)增條帶均呈現(xiàn)

3、多態(tài)性，平均等位基因(Na)數(shù)目為9個(4～13)，平均觀察雜合度（Ho）和期望雜合度（He）分別為0.70(0.2～0.938)和0.81(0.303～0.925)。經(jīng)進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，有4個微衛(wèi)星位點（ShuI-35，ShuI-62，ShuI-51和ShuI-15）偏離哈迪-溫伯格平衡(P＜0.05)，但是沒有發(fā)現(xiàn)位點間的連鎖不平衡。這12個具有多態(tài)性微衛(wèi)星位點將對黑頸長尾雉的保護(hù)遺傳學(xué)或者長尾雉屬的其它物種種群遺傳學(xué)研究提供了很好的

4、分析標(biāo)記工具。
　　2、線粒體DNA數(shù)據(jù)和微衛(wèi)星DNA（12對微衛(wèi)星引物擴(kuò)增）數(shù)據(jù)分析表明，黑頸長尾雉的田林-隆林-西林種群(TLX)、樂業(yè)-下老種群(LX)、羅甸種群(LD)和坡結(jié)種群(PJ)均具有較高的遺傳多樣性。4個地理種群73個個體全部擴(kuò)增成功，獲得73條黑頸長尾雉mtDNA D-loop基因全序列(1143bp)，檢測到58個變異位點，并定義了39個單倍型。各地理種群的單倍型多樣性（h）分別為0.812、0.926、0.

5、722和0.905;核苷酸多樣性（π）分別為0.00516、0.0075、0.00463和0.01;微衛(wèi)星DNA的種群雜合度期望值(HE)分別為0.75、0.77、0.79和0.81，觀察值雜合度（Ho）分別為0.73、0.77、0.83和0.72。
　　3、利用黑頸長尾雉線粒體DNA控制區(qū)序列以鄰接法(NJ)構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)生樹和單倍型網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖顯示黑頸長尾雉4個種群的單倍型并沒有按照獨(dú)自的地理種群聚集在一起，而是互相混合分散的分布

6、在系統(tǒng)進(jìn)化樹上，沒有表現(xiàn)出明顯的系統(tǒng)地理格局。微衛(wèi)星數(shù)據(jù)多元協(xié)調(diào)的主成分分析(principal coordinateanalysis，PCA)也顯示相同的結(jié)果，4個地理種群的73個體相互混合聚在一起，并形成出現(xiàn)獨(dú)立進(jìn)化的地理種群單元。通過用STRUCTURE軟件對種群遺傳結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，種群間不存在聚類關(guān)系，種群之間沒有出現(xiàn)明顯的遺傳分化，說明了種群間個體交流頻繁。
　　3、對黑頸長尾雉種群的選擇中性檢測(neutrality t

7、est)進(jìn)行分析，結(jié)果表明，各個種群的Tajima's D、Fu and Li's D、Fu and Li's F、Fu's Fs statistic等參數(shù)均不顯著，線粒體DNA中性檢測結(jié)果為Fu's Fs=-0.971(p＞0.05)和擬合優(yōu)度檢測結(jié)果SSD=0.78094(P＜0.01)，表明黑頸長尾雉種群歷史上并沒有發(fā)生過顯著的種群擴(kuò)張?；谖⑿l(wèi)星數(shù)據(jù)，采用雜合子檢驗法(Wilcoxon's Test)及TPM突變模型檢測種群近期

8、動態(tài)及遺傳瓶頸效應(yīng)，結(jié)果表明種群未經(jīng)歷過近期的瓶頸效應(yīng)，整個黑頸長尾雉種群處于一個穩(wěn)定狀態(tài)。
　　4、在種群遺傳分化檢測中，線粒體DNA序列數(shù)據(jù)分析(AMOVA)結(jié)果表明，遺傳分化主要來自于種群內(nèi)部個體之間，達(dá)到了98.03％，而種群間的差異僅為1.97％，而微衛(wèi)星數(shù)據(jù)分析(AMOVA)結(jié)果與線粒體DNA序列分析結(jié)果相似，種群內(nèi)部個體之間的差異達(dá)到97％之多，而種群間的差異僅為3％，其結(jié)果進(jìn)一步說明了黑頸長尾雉的種群間基因交流非常

9、頻繁（表3-10和表3-17）。
　　另外，線粒體DNA和微衛(wèi)星DNA遺傳標(biāo)記共同分析結(jié)果表明，323國道對TLX和LX兩個種群之間并沒有產(chǎn)生阻隔效應(yīng)，南盤江、和紅水河在LX和LD、LX和PJ、TLX和LD種群之間均沒有形成天然的地理阻隔，南盤江和紅水河兩岸的種群基因交流頻繁。此外，本文所研究的黑頸長尾雉4個地理種群之間沒有遺傳分化，因此，建議把這4個地理種群當(dāng)做一個管理單元進(jìn)行保護(hù)管理。
　　5、問卷調(diào)查結(jié)果說明，民眾野生

10、動物保護(hù)意識薄弱以及大量的人為獵捕是導(dǎo)致黑頸長尾雉種群數(shù)量急劇減少的主要因素。為了有效遏制黑頸長尾雉種群數(shù)量不斷減少的趨勢，急需對黑頸長尾雉進(jìn)行相應(yīng)保護(hù)，主要措施為:(1)重視和加強(qiáng)偏遠(yuǎn)山區(qū)民眾的野生動、植物保護(hù)科普和法律宣傳教育，提高廣大公眾的保護(hù)意識和法制觀念;(2)加強(qiáng)野生動物管理的監(jiān)督和執(zhí)法力度，對非法偷獵野生動物的不法分子給予堅決的查處，通過法律手段來震懾各種偷獵野生動物的不法分子;(3)加快偏遠(yuǎn)山區(qū)的經(jīng)濟(jì)建設(shè)和發(fā)展，盡早的讓