腎癌cyclinE和p53表達的臨床病理學意義.pdf

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文腎癌cyclinE和p53表達的臨床病理學意義姓名：李旭東申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學指導教師：劉同才20000301Ⅲ～Ⅳ期2 0 例．按F u h r m a n 氏( 1 9 8 2 ) 腎細胞癌形態(tài)分級系統(tǒng)，G ，1 Q 例，G ：1 2 例．G 。1 4 例，G ．1 0 例。全部病例均經(jīng)隨訪。正常對照組：選擇1 5 例癌旁的正常腎組織作正常對照。所有標本均經(jīng)l o ％福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)切片

2、，厚度為4 t t m 。二、試劑：兔抗人c y c l i n E ( H E - - 1 2 ) 單克隆抗體，工作濃度1 ：5 0 ，鼠抗人p 5 3 突變型( D 0 —7 ) 單克隆抗體，工作濃度1 ：1 0 0 。實驗方法1 、H E 染色：所有切片均作H E 染色2 、采用免疫組織化學S～P 法進行組織染色。步驟：石蠟切片常規(guī)二甲苯脫蠟至水，3 ％H 。O 。孵育5 分鐘，微波爐抗原修復，滴加抗原修復液，室溫1 0 分鐘，P

3、 B S 沖洗三次，加1 0 ％正常山羊血清室溫1 0 分鐘，去血清滴加稀釋一抗，3 7 ℃孵育一小時，P B S 沖洗3 次，加二抗3 7 ℃孵育1 0分鐘，P B S 沖洗3 次，辣根酶標記的鏈霉卵自素3 7 “ C 孵育1 0 分鐘，P B S 沖洗三次，D A B 顯色，自來水充分沖洗，蘇木素復染，透明封片。陰性對照：以P B S 代替一抗作陰性對照。陽性對照：已知c y -c l i n E 和p 5 3 染色陽性的乳腺癌組織

4、切片。結(jié)果判定標準：c y c l i n E和p 5 3 陽性表達均定位于細胞核內(nèi)，c y c l i n E 陽性反應(yīng)物也可見于細胞質(zhì)內(nèi)。以細胞核或細胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒作為陽性細胞，根據(jù)陽性細胞數(shù)判定結(jié)果：陰性( 一) ：無陽性細胞或陽性細胞數(shù)< 5 ％；陽性( + ) ；陽性細胞數(shù)≥5 ％。統(tǒng)計學處理：兩組間比較采用卡方檢驗，相關(guān)分析采用列聯(lián)表資料卡方檢驗，生存率曲線采用壽命表法繪制，L o g - - R a n k 檢驗