生淀粉糖化酶菌株SDE的選育、產(chǎn)酶條件及酶學(xué)性質(zhì)初步研究.pdf

1、糖化酶，全稱葡萄糖淀粉酶(Glucoamylase EC.3.2.1.3)，又稱淀粉葡萄糖酶，功能在于從淀粉、糊精或糖原等碳水化合物的非還原性末端釋放β-D-葡萄糖，被廣泛地應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、發(fā)酵等工業(yè)，具有很高的商業(yè)價(jià)值，是我國(guó)產(chǎn)量最大的酶制劑產(chǎn)品之一。一般的糖化酶只能作用于糊化和液化后的淀粉。生淀粉糖化酶是指對(duì)不經(jīng)過(guò)蒸煮糊化的生淀粉顆粒具有水解活性產(chǎn)生葡萄糖的酶類，簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)淀粉水解工藝中的糊化、液化和糖化步驟，具有良好的節(jié)能前景。

2、因此，分離和篩選生淀粉糖化酶菌株受到廣大研究者的高度重視。 本文從淀粉制品廠周圍土壤中分離到一株高產(chǎn)生淀粉糖化酶的菌株SDE，經(jīng)形態(tài)、生理生化及16S rDNA序列分析將其鑒定為Cellulosimicrobium sp.。 SDE菌株的最適生長(zhǎng)溫度和pH分別為30℃和pH7.0。在供試的幾種碳源中，SDE對(duì)半乳糖利用最好；以有機(jī)氮為氮源時(shí)生長(zhǎng)較好，在供試的幾種無(wú)機(jī)氮源中，SDE對(duì)NH4NO3利用最好；該菌株除對(duì)慶大霉

3、素、卡那霉素有抗性外，對(duì)氨芐青霉素、紅霉素、青霉素、鏈霉素、氯霉素、利福平和四環(huán)素均敏感。 該酶以生玉米淀粉為底物時(shí)，最適作用pH6.0，最適作用溫度40℃；SDE菌株產(chǎn)生的生淀粉糖化酶在50℃以上熱穩(wěn)定性較差；但Ca2+可提高粗酶液的熱穩(wěn)定性，在Ca2+存在下80℃處理一個(gè)小時(shí)后，酶活仍保持在50％以上；但粗酶液的酸堿穩(wěn)定性不好，只有在pH6.0-7.0酶能保持較高的活力。Ca2+、Zn2+對(duì)酶有激活作用；但Ba2+、Cu2+

4、的存在對(duì)酶有抑制作用。生淀粉糖化酶為胞外酶和誘導(dǎo)酶。 以SDE為出發(fā)菌株，通過(guò)HNO2誘變處理，獲得了一株突變株SDE-28，其產(chǎn)酶能力由176.5U/mL提高到288U/mL。突變株SDE-28再經(jīng)過(guò)紫外誘變，經(jīng)篩選后獲得了一株穩(wěn)定性較好的生淀粉糖化酶高產(chǎn)菌株SDE-28-10，酶活達(dá)到了409U/mL。與出發(fā)菌株SDE相比，SDE-28-10突變株產(chǎn)酶活力提高了1.32倍。 通過(guò)碳氮源的正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了SDE-28-1