融合蛋白PTD-XIAP（BIR3-RING）及PTD-Calbindin D28K對腦缺血再灌注損傷的保護作用.pdf

1、中風是人類致殘、致死的主要原因之一;腦梗塞是腦血管病中最常見的類型.近年來人們對缺血再灌注腦損傷的機制有了全新的認識.Ca<'2+>超載在缺血中心區(qū)腦組織的損傷中起重要作用,而細胞凋亡是缺血周邊區(qū)遲發(fā)性神經元損傷的主要原因.最近的研究表明,凋亡也參與缺血中心區(qū)的損傷,而Ca<'2+>超載也參與凋亡的發(fā)生.抑制凋亡的發(fā)生,或者阻止細胞內Ca<'2+>超載,均可以減輕腦組織缺血再灌注損傷.Calbindin D28K(CaBP)是細胞內天然

2、存在的Ca<'2+>緩沖劑,維持細胞內Ca<'2+>穩(wěn)態(tài),使細胞免受由于Ca<'2+>增高所致的損傷;而XIAP被認為是目前作用最強的凋亡抑制因子,可以同時抑制Caspase-3,7,9,從而抑制凋亡的發(fā)生.已有資料表明,二者對缺血再灌注腦損傷有保護作用.血腦屏障和生物膜的存在,不允許大分子多肽或蛋白進入細胞,而通過病毒等載體進行轉基因操作則因為存在許多問題,限制了其實際應用.PTD介導的蛋白質轉導技術既可以高效地將目的蛋白質轉導進入靶

3、器官細胞中,又可以透過血腦屏障進入腦組織神經元,為解決這一問題提出新思路.基于以上情況,該實驗選擇阻滯Ca<'2+>超載和抑制細胞凋亡這兩個作用靶點,首先用原核表達系統(tǒng)表達并純化融合蛋白PTD-CaBP及PTD-XIAP(BIR3-RING),然后通過PTD介導的蛋白質轉導作用,分別在體外和體內研究它們的缺血性腦保護作用,為探索缺血腦保護的新途徑提供理論基礎.結論1用重組pTrans Vector質粒表達的融合蛋白PTD-XIAP(BI

4、R3-RING)和PTD-Calbindin D28K不僅可以高效地轉導進入體外培養(yǎng)的cos7細胞及器官型海馬腦片細胞內,而且通過腹腔注射入小鼠體內后可以被吸收入血,穿透血腦屏障而進入腦細胞內;2細胞凋亡在大鼠腦缺血再灌注損傷中起重要作用.缺血2h、再灌注72h后,缺血周邊區(qū)可見大量的活性Caspase-3(+)及TUNEL(+)細胞;在梗死中心區(qū)殘存的細胞內也可發(fā)現(xiàn)這些陽性細胞.梗死側半球內出現(xiàn)大量的活性Caspase-3片斷,Pro