有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌的分離鑒定及其產(chǎn)酶特性研究.pdf

1、有機(jī)磷農(nóng)藥的廣泛使用造成了嚴(yán)重的環(huán)境問題，并已對人類健康帶來潛在危害。有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的去除尤為重要，有機(jī)磷農(nóng)藥降解微生物及其產(chǎn)生的降解酶是消除有機(jī)磷農(nóng)藥污染的有效、安全的方法，最具應(yīng)用前景。
　　 從有機(jī)磷農(nóng)藥污染的土壤中分離得到的三株有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌：JMUPMD-1，JMUPMD-2，JMUPMD-3，利用形態(tài)觀察、生理生化實驗和rDNA ITS序列分析分別對三株菌進(jìn)行鑒定。對JMUPMD-3菌株產(chǎn)有機(jī)磷農(nóng)藥解酶進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)

2、優(yōu)化，根據(jù)優(yōu)化結(jié)果進(jìn)行7 L罐發(fā)酵，對菌株的發(fā)酵動力學(xué)進(jìn)行分析。
　　 JMUPMD-1的rDNA ITS序列與布朗克假絲酵母(Candida blankii)的同源性為99％，形態(tài)特征和生理生化特性與布朗克假絲酵母相符合，因此鑒定為布朗克假絲酵母。JMUPMD-2 rDNA ITS序列與米曲霉(Aspergillus oryzae)的同源性為99％，菌落形態(tài)和顯微形態(tài)都與米曲霉特征相符，鑒定為米曲霉。JMUPMD-3的rDNA

3、 ITS序列與黃藍(lán)狀菌(Talaromyces flavus)同源性為99％，形態(tài)特征與黃藍(lán)狀菌基本符合，鑒定為黃藍(lán)狀菌(無性世代為Penicillium vermiculatum Dangeard)。
　　 三株菌產(chǎn)生的甲基對硫磷(Parathion-methyl，PM)降解酶均屬于胞內(nèi)酶，其中，T.Flavus JMUPMD-3的產(chǎn)酶能力最強(qiáng)。搖瓶優(yōu)化后的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件為：蔗糖19.0 g/L，酵母膏3.2 g/L，MgS

4、O4·7H2O 0.5 g/L，KCl 0.5 g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.018 g/L，Triton X-100 2％(v/v)，甲基對硫磷乳油 0.2％(v/v)，發(fā)酵液初始pH 8.0，培養(yǎng)溫度24℃。用初始培養(yǎng)基在7 L罐中發(fā)酵T.Flavus JMUPMD-3，PM降解酶活力最高為46.1 U/L，采用優(yōu)化的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件發(fā)酵，PM降解酶活力最高為127.1 U/L，比第一批提高了183％。在第二批7 L罐發(fā)酵基礎(chǔ)上

5、，取消Triton X-100添加，并維持發(fā)酵過程培養(yǎng)基的pH為6.0，生物量提高3.2 g/L，最高酶活力水平持平，但穩(wěn)定期延遲。動力學(xué)分析表明，菌株對數(shù)生長期的24 h?56 h，PM降解酶的合成與菌體的生長相偶聯(lián)，PM降解酶的合成與PM的消耗有關(guān)，而PM的消耗不受酶產(chǎn)生的影響。PM降解酶對敵敵畏也有良好降解作用，可能屬于廣譜性有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶。
　　 分離到三株有機(jī)磷農(nóng)藥降解真菌：Candida blankii，Asper