tPA乳腺特異性表達(dá)載體的構(gòu)建及其瞬時(shí)表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、該研究中,首先將克隆的乳清酸蛋白基因(WAP)2.4kb啟動(dòng)子插入pBluescript質(zhì)粒,構(gòu)建質(zhì)粒pW;然后將克隆的0.37kb加poly A信號(hào)插入WAP啟動(dòng)子的下游,構(gòu)建可指導(dǎo)外源基因在乳腺特異性表達(dá)的載體pWA;最后將克隆的目的基因2.1kb tPA cDNA連接于WAP啟動(dòng)子和加poly A信號(hào)之間,構(gòu)建tPA乳腺特異性表達(dá)載體pWTA.構(gòu)建成功的pWTA表達(dá)載體通過(guò)脂質(zhì)轉(zhuǎn)染胺試劑Lipofectamine<'TM2000>

2、轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞系,通過(guò)體外注射轉(zhuǎn)移至妊娠期小鼠乳腺,以原位雜交技術(shù)檢測(cè)tPA在乳腺癌細(xì)胞系和泌乳期小鼠乳腺中的瞬時(shí)表達(dá),驗(yàn)證pWTA表達(dá)載體的表達(dá)能力.結(jié)論:1.成功克隆了WAP啟動(dòng)子,并構(gòu)建了乳腺特異性表達(dá)載體pWA.2.成功克隆了tPA基因,并構(gòu)建了tPA乳腺特異性表達(dá)載體pWTA.3.載體pWTA可在人乳腺癌細(xì)胞和泌乳期小鼠乳腺特異性表達(dá),為乳腺特異性表達(dá)載體.4.該研究構(gòu)建的tPA乳腺特異性表達(dá)載體pWTA,解決了建立乳腺生物反

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