醌類化合物1,2-NQ和PQ誘導(dǎo)肺組織損傷作用的研究.pdf

1、在城市中，柴油機(jī)排放顆粒物(DEP)是大氣污染的重要組成成分，1，2-NQ和PQ是存在于DEP中的主要醌類化合物，能導(dǎo)致多種呼吸道疾病的加重、惡化。然而，它們對肺組織損傷的作用尚不清楚。本次實驗通過氣管內(nèi)灌注1，2-NQ和PQ，研究1，2-NQ和PQ對肺組織病理組織學(xué)及相關(guān)血液學(xué)變化的影響。通過檢測細(xì)胞凋亡和壞死，研究1，2-NQ和PQ對細(xì)胞損傷的影響。采用qt-PCR的方法，研究1，2-NQ和PQ對炎癥細(xì)胞因子相對表達(dá)量的影響。

2、>　　試驗一:選用4-6周齡20g左右的雄性ICR小鼠用于實驗，A549細(xì)胞和dU937細(xì)胞用于體外實驗。將動物隨機(jī)分成三個組，異氟烷麻醉，實驗組分別將1，2-NQ和PQ灌注到小鼠的氣管內(nèi)，對照組使用PBS溶液，各組在24h、48h和72h取三只小鼠采集血液和肺臟組織樣本，檢測相關(guān)血液學(xué)變化，肺組織病理學(xué)觀察肺損傷。試驗二:A549細(xì)胞和dU937細(xì)胞分別接種子24孔板內(nèi)，用1，2-NQ和PQ染毒處理，隨后檢測細(xì)胞凋亡和壞死。試驗三:A

3、549細(xì)胞和U937細(xì)胞分別接種于6孔板內(nèi)，然后用10 ng/mL的LPS預(yù)處理3h后，1，2-NQ和PQ染毒處理，收集細(xì)胞樣品提取RNA，熒光定量PCR方法檢測TNF-α、IL-1β和MIP-1α基因的相對表達(dá)量。結(jié)果如下:
　　1.肺組織病理學(xué)檢測顯示:對照組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整，未見肺組織損傷。與對照組相比，1，2-NQ組可見肺間質(zhì)內(nèi)毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，伴有炎性細(xì)胞浸潤，部分肺泡壁腫脹。PQ組小鼠肺間質(zhì)內(nèi)血管充血，炎性細(xì)胞聚集，

4、肺泡壁明顯增厚，部分肺泡壁破裂，肺泡相互融合。血液學(xué)檢測結(jié)果顯示:與對照組相比，1，2-NQ組白細(xì)胞數(shù)量顯著升高(P＜0.05)，淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著升高(P＜0.05)，嗜中性粒細(xì)胞數(shù)量顯著升高(P＜0.05);與對照組相比，PQ組血液學(xué)檢測結(jié)果無顯著性變化(P＞0.05)。
　　2.1，2-NQ染毒處理A549細(xì)胞，細(xì)胞壞死率呈時間-劑量依賴性顯著升高(P＜0.01)，細(xì)胞凋亡率顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。PQ染毒處理

5、A549細(xì)胞，細(xì)胞壞死率呈時間-劑量依賴性顯著升高(P＜0.01)，細(xì)胞凋亡率在24h顯著升高(P＜0.01)。1，2-NQ染毒處理dU937細(xì)胞，與對照組相比，細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞壞死率均呈時間-劑量依賴性升高（P＜0.05或P＜0.01）。PQ染毒處理dU937細(xì)胞，與對照組相比，細(xì)胞凋亡率和壞死率均呈時間-劑量依賴性顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)。
　　3.1，2-NQ染毒處理A549細(xì)胞，與對照組相比，TNF-α、 I

6、L-1β和MIP-1α的基因相對表達(dá)量均未見顯著性變化(P＞0.05)，在LPS預(yù)處理后，TNF-α和IL-1β的基因相對表達(dá)量呈劑量依賴性升高(P＜0.01)。PQ染毒處理A549細(xì)胞，與對照組相比，TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相對表達(dá)量均未見顯著性變化(P＞0.05)，在LPS預(yù)處理后，TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相對表達(dá)量均顯著升高（P＜0.01）。1，2-NQ染毒處理dU937細(xì)胞，與對照組相比，IL

7、-1β和MIP-1α的基因相對表達(dá)量均顯著降低(P＜0.05或P＜0.01)，在LPS預(yù)處理后，IL-1β和MIP-1α的基因相對表達(dá)量呈劑量依賴性降低(P＜0.05或P＜0.01)。PQ染毒處理dU937細(xì)胞，與對照組相比，TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相對表達(dá)量均未見顯著性變化(P＞0.05)，在LPS預(yù)處理后，低劑量PQ誘導(dǎo)TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相對表達(dá)量顯著升高(P＜0.01)，而隨著PQ濃度的增