一種新型寡糖的細(xì)胞生物學(xué)活性研究.pdf

1、目的：
　　大量研究表明植物，尤其是傳統(tǒng)草藥學(xué)中的藥用植物可以被提取出有效成分用于臨床或科學(xué)研究使用，其中最有代表性的成果分別是我國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)的青蒿素和外國(guó)研究人員分離的紫杉醇。這些植物的次生代謝產(chǎn)物雖然對(duì)植物自身生長(zhǎng)并非絕對(duì)必要，但卻有著較高的潛在藥用價(jià)值，這與其往往作用于植物的天敵或競(jìng)爭(zhēng)植物的功能相一致。近二十年，研究者們更進(jìn)一步的把植物相關(guān)的糖類(lèi)的藥用價(jià)值作為新的研究方向，尤以多糖的相關(guān)研究為多。已在多種經(jīng)典的傳統(tǒng)藥用植物中

2、發(fā)現(xiàn)了有臨床價(jià)值的多糖。
　　同時(shí)與藥用植物共生的微生物也可能是其有效成分的來(lái)源，這可能通過(guò)兩種機(jī)制來(lái)完成：一種是微生物與植物的信息交流刺激藥用植物合成特定的次生代謝產(chǎn)物；另一種即微生物自身合成某些特殊的活性物質(zhì)。而在這些共生微生物中，植物內(nèi)生菌又是一個(gè)多樣性頗為豐富的類(lèi)群，已經(jīng)有較多針對(duì)植物內(nèi)生菌的研究發(fā)表，并報(bào)道了一些其生物活性及潛在臨床應(yīng)用價(jià)值的發(fā)現(xiàn)。
　　我國(guó)傳統(tǒng)藥學(xué)認(rèn)為黨參具有補(bǔ)中益氣，健脾益肺之功效?，F(xiàn)代科學(xué)研究

3、對(duì)黨參及其提取物的生物活性和臨床價(jià)值有一定的研究報(bào)道，其中包括：抗疲勞，改善記憶能力，增強(qiáng)免疫系統(tǒng)某些功能，保護(hù)胃腸道黏膜等。而成分相關(guān)的研究主要集中在其多糖成分的研究上，而由于多糖自身的特性因而導(dǎo)致難以確定具體成分，所以無(wú)法確定具體有效成分的結(jié)構(gòu)。本課題組的合作者另辟蹊徑，分離了黨參的一種內(nèi)生菌（命名為14-DS-1），并提取了其胞外寡糖。結(jié)合我們課題組的專(zhuān)業(yè)方向，本研究主要從該胞外寡糖對(duì)免疫系統(tǒng)（具體而言為巨噬細(xì)胞）激活和血管新生的

4、影響進(jìn)行研究，以確定其是否有相關(guān)的生物學(xué)活性和潛在臨床價(jià)值。
　　方法：
　　免疫相關(guān)部分：主要以小鼠巨噬細(xì)胞系RAW246.7為模型，研究14-DS-1胞外寡糖在體外對(duì)巨噬細(xì)胞的影響。具體實(shí)驗(yàn)主要包括：不同濃度處理下的形態(tài)學(xué)改變、TNF-α在mRNA水平的表達(dá)（real time PCR）、Griess反應(yīng)（監(jiān)測(cè)NO分泌量）、吞噬能力測(cè)定、transwell實(shí)驗(yàn)、微絲形態(tài)觀察和細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)等。
　　血管新生相關(guān)部分：

5、主要使用HUVEC、HeLa、A549和MDA-MB-231等細(xì)胞系。主要實(shí)驗(yàn)包括：體外成管實(shí)驗(yàn)、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、微管形態(tài)實(shí)驗(yàn)、紡錘體形態(tài)與定位觀察、流式細(xì)胞分析等。
　　結(jié)果：
　　在14-DS-1胞外寡糖處理下，形態(tài)學(xué)與TNF-α表達(dá)量、NO分泌量等指標(biāo)均顯示細(xì)胞進(jìn)入活化狀態(tài)，但其吞噬能力并未觀測(cè)到變化。細(xì)胞在 transwell實(shí)驗(yàn)中遷移能力也明顯升高，微絲也顯示出放射狀的纖維狀結(jié)構(gòu)，但普通的粘附實(shí)驗(yàn)并無(wú)變化。
　

6、　高濃度該寡糖會(huì)抑制體外成管，抑制細(xì)胞遷移。對(duì)微管形態(tài)無(wú)明顯影響，細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)無(wú)明顯影響。處理組的紡錘體與基底面（玻片提供的培養(yǎng)平面）相對(duì)角度變大，處理組紡錘體定位偏移較對(duì)照組為大。藥物處理組細(xì)胞更高比例滯留于S期，高濃度組凋亡比例升高
　　結(jié)論：
　　14-DS-1胞外寡糖可以在多個(gè)指標(biāo)上激活小鼠巨噬細(xì)胞系，同時(shí)影響其遷移能力和微絲形態(tài)，但不影響其吞噬能力和對(duì)膠原的粘附。對(duì)體外成管和傷痕愈合有一定影響。機(jī)制方面，已經(jīng)初步排